层出镰孢菌（Fusarium proliferatum）是一种能侵染小麦、大麦、玉米等谷类作物的重要土传病原真菌。除了能侵染小麦的根部引起小麦根腐病外,还能够侵染玉米穗部造成玉米穗腐病,这对于小麦-玉米轮作的黄淮海地区有严重的危害。近年来,荧光蛋白作为一种标记蛋白,广泛的用于对各种微生物、植物及动物进行标记。利用荧光蛋白对病原真菌进行标记能够直观的观察活体病原真菌在受体组织中的侵染和定殖过程,为研究植物与病原菌之间的互作关系奠定了良好的基础。本研究采用电击介导的遗传转化法,将红色荧光蛋白基因（Ds Red）导入层出镰孢菌（F.proliferatum）基因组中,并获得稳定转化子,建立了层出镰孢菌红色荧光蛋白标记的遗传转化体系,研究结果将为进一步深入研究层出镰孢菌与小麦和其他寄主间的互作关系奠定基础。主要研究结果如下:1.利用梯度筛选,确定了层出镰孢菌（F.proliferatum）在固体PDA平板培养条件下的潮霉素耐受浓度为600μg·ml-1;利用两因素试验设计方法,优化了电击转化的孢子萌发条件,得到了适用于电击转化的孢子萌发的适宜条件:生长6d,萌发时间10h的孢子。确定了对层出镰孢菌（F.proliferatum）的孢子进行电击转化的电压参数范围为:1400¹800v。2.成功构建了电击转化所需要携Ds Red基因的丝状真菌表达载体,并利用电击介导法将Ds Red基因导入F.proliferatum菌株Fp-1中,获得约140个转化子,对转化子进行了DNA的提取、PCR验证,荧光显微镜检测,结果发现转化子84个转化子的菌丝和分生孢子表达明亮的红色荧光,利用基因特异标记扩增证明Ds Red基因整合到了这些转化子的基因组中。3.测定了转化子菌株的生长速度,不同p H下的生长能力。最终选用了与野生型菌株各方面性状相近的转化子Fp-RFP。对Ds Red标记菌株Fp-RFP的生长特性和遗传稳定性分析证明,Ds Red基因能够在转化子菌株中稳定的遗传,菌落的生长速度与野生型菌株相比没有明显差异,虽在不同的p H条件下的生长情况略有差异,但自然p H下无明显差异,不影响转化子菌株在小麦组织中侵入和扩增。转化子与野生型菌株的胞外酶代谢能力也基本一致,均能产生果胶酶、蛋白酶、淀粉酶及纤维素酶。4.分别用转化子Fp-RFP菌株和野生型菌株Fp-1接种鲁麦21小麦,测定其在侵染的不同时期,小麦植株的H₂O₂含量和保护酶类的活性变化。转基因菌株的侵染对小麦H₂O₂含量和保护酶类的活性的影响与野生型菌株相比差异不显著,说明转基因菌株保持了与野生型相近的侵染能力和致病性。在接种初期,SOD、CAT、MDA活性及H₂O₂的含量都有显著提升,SOD等酶的变化趋势与H₂O₂变化趋势一致,符合理论预测。POD酶的活性变化在接种初期并没有显著提升,且转化子菌株引起的酶活有所下降,而在48h时,酶活才有显著提高,说明POD酶在层出镰孢菌的侵染过程的中后期才发挥作用。通过对结果分析可知,在侵染前期,CAT酶的活性变化最大,而在侵染后期,POD的酶活变化最大。层出镰孢菌遗传转化体系的建立,为以后的层出镰孢菌的分子遗传特性、致病性机制和与宿主植物互作等研究提供了可能。