【摘 要】
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[目的]免疫性血小板减少症（immunethrombocytopenia,ITP）是一种以血小板减少为特征的获得性自身免疫性疾病。ITP的发病机制迄今仍未完全阐明。目前一致认为ITP的发病是一个多环节的过程,体液免疫和细胞免疫是主要的发病机制。CD83被认为是成熟的树突状细胞（dendric cells,DCs）最具特征性的细胞表面标记之一。CD83是重要的共刺激分子一员,可能在自身免疫性疾病中发
【基金项目】
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省基础研究计划（2018FE001-233）； 研究生创新基金（2021S051）；
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[目的]免疫性血小板减少症（immunethrombocytopenia,ITP）是一种以血小板减少为特征的获得性自身免疫性疾病。ITP的发病机制迄今仍未完全阐明。目前一致认为ITP的发病是一个多环节的过程,体液免疫和细胞免疫是主要的发病机制。CD83被认为是成熟的树突状细胞（dendric cells,DCs）最具特征性的细胞表面标记之一。CD83是重要的共刺激分子一员,可能在自身免疫性疾病中发挥着重要作用,已经有不少学者对CD83与自身免疫性疾病作用机制进行了研究。如桥本甲状腺炎和Graves’疾病,克罗恩和溃疡性结肠炎,类风湿性关节炎和多发性硬化等疾病高表达CD83。但是在ITP中的具体作用机制尚不明确。因此本课题旨在探讨CD83与CD4+T细胞亚群的关系,明确CD83在ITP患者自身免疫调控中的具体作用和地位,为发展ITP治疗措施提供理论基础。[方法]1.分离ITP患者和健康对照组的外周血单个核细胞,给予antiCD3/CD28单抗刺激细胞激活与扩增,培养72小时后流式细胞仪检测CD4+T细胞上的CD83、CD4、CD25、FoxP3的表达。同时RT-qPCR检测单个核细胞上的CD83、GATA-3、TGF-β、IL-10、FoxP3、TLR4、T-bet 的 mRNA 相对表达量。2.ELISA检测ITP患者和健康对照组血浆中sCD83的浓度。3.将ITP患者和健康对照单个核细胞体外诱导为树突细胞,检测CD83的表达情况。4.siRNA基因沉默树突细胞CD83,共设计了 3条序列:siRNA1,siRNA2,siRNA3,NC（阴性对照）,转染48小时后RT-qPCR检测抑制率,筛选抑制率最高的一条序列。同时质粒过表达树突细胞CD83,NC（阴性对照）,转染48小时后RT-qPCR检测过表达效率。5.CD4+T细胞与DCs共培养检测细胞增殖。共分为5个组:siRNA转染树突细胞CD83,NC（阴性对照）;质粒过表达DC-CD83（pcDNA）,pEX-1（阴性对照）:Blank（空白对照）。免疫磁珠分选CD4+T细胞与转染后的DCs细胞共培养检测细胞增殖。6.ELISA 检测共培养上清 IFN-γ、IL-17、TGF-β、IL-10 的浓度。7.流式细胞仪检测DCs与CD4+T细胞共培养后Tregs的表达。[结果]1.CD4+T细胞和Tregs细胞表达CD83,健康对照和ITP患者CD4+CD83+、CD83+CD4+CD25+FoxP3+的表达情况为（7.844±4.43%vs 17.715±7.77%,P=0.109;16.946±2.39%vs 10.798±4.67%,P=0.095）。2.ITP患者单个核细胞上CD83、TLR4的mRNA相对表达量显著高于健康对照（1.387vs 1,P=0.043;6.807 vs 1,P=0.002）,而 GATA-3、IL-10、FoxP3均比健康对照低（0.489vs 1,P=0.007;0.333 vs 1,P=0.016;0.423 vs 1,P=0.047）。ITP患者与健康对照中的TGF-β、T-bet无明显差异（0.878 vs 1,P=0.396;1.101 vs 1,P=0.539）。3.ITP患者血浆中sCD83的浓度较健康对照高（112.77±36.24pg/ml vs 44.02±19.44pg/ml,P=0.001）。4.ITP患者树突细胞CD83的蛋白水平和mRNA水平表达均较健康对照组高（56.16±4.52%vs 27.80±3.85%,P=0.001;3.83 vs 1,P=0.006）。5.siRNA-CD83 干扰树突细胞抑制率为:siRNA1:94%;siRNA2:97%;siRNA3:77%（P=0.018）,siRNA2 抑制率最高。pcDNA 过表达树突细胞 CD83 5.6倍。6.siRNA下调DCs-CD83抑制了ITP患者CD4+T细胞的增殖,过表达CD83则促进了 CD4+T细胞的增殖。7.siRNA 下调 DCs-CD83 抑制了 ITP 患者 IFN-γ、IL-17 的表达,IL-10、TGF-β的分泌增加。8.siRNA下调DCs-CD83导致ITP患者CD4+T细胞减少,诱导Tregs细胞分化能力减弱。[结论]ITP患者Tregs细胞功能存在缺陷,Th1/Th2免疫失衡,CD83参与了 ITP的发病机制。siRNA-CD83干扰树突细胞后抑制了 CD4+T细胞的增殖,还抑制了炎症因子IFN-γ、IL-17的分泌。通过siRNA-CD83干扰树突细胞,逆转了 ITP患者Th1/Th2、Th17/Tregs的失衡,为ITP的治疗提供新思路。
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