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糖尿病(DM)是一组因胰岛素绝对或相对分泌不足和(或)胰岛素利用障碍引起的碳水化合物、蛋白质和脂肪代谢紊乱性疾病,以血浆葡萄糖升高为主要标志。而2型糖尿病(T2DM)是由于靶器官对胰岛素的敏感性降低,胰岛β细胞分泌胰岛素障碍引起的,其发病机制是胰岛素抵抗(IR)。抗DM对于预防和控制其并发症具有至关重要的作用。从作用温和,毒副作用小的天然产物中提取治疗T2DM的活性成分得到了人们的极大关注。为了评价豆科植物补骨脂(Psoralea corylifolia Linn.)中化合物的降糖活性,本文(1)使用地塞米松(Dex)构建脂肪细胞IR模型,并采用葡萄糖氧化酶法检测补骨脂酚(Bakuchiol,BL)作用后IR脂肪细胞上清液葡萄糖含量。(2)采用高脂高糖饲料联合STZ诱导T2DM小鼠模型,并在给药的第10、20和30天进行尾静脉采血,检测小鼠空腹血糖值(FBG)。结果发现,单萜类化合物补骨脂酚(BL)能显著促进IR脂肪细胞进行葡萄糖摄取(P<0.001),降低T2DM小鼠FBG(P<0.001)。在活性筛选的基础上,利用蛋白组学技术探索BL降血糖作用机制。以小鼠附睾脂肪组织为研究对象,采用蛋白质组学技术寻找与疾病相关的特异性蛋白质和药物治疗相关的蛋白质靶点,发现差异蛋白富集数目最多和显著性最强的通路是PPAR信号通路,而PPAR信号通路与糖脂代谢、炎症、氧化应激和IR等密切相关。其中,PPARγ能提高IR小鼠脂肪细胞和骨骼肌细胞中GLUT4的蛋白表达水平,促进GLUT4的膜移位,进而增加胰岛素敏感性,改善机体糖脂代谢,逆转IR的发展。炎症和氧化应激能进一步加重IR。接着进行了体内验证蛋白质组学的研究。取小鼠血清检测其糖脂代谢指标、抗氧化应激能力和炎症因子的含量。取小鼠肝脏和胰腺组织进行病理组织变化研究。结果显示:BL能显著降低甘油三酯(TG)、糖化血清蛋白(GSP)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-1β和IL-6的水平,显著增加胰岛素(INS)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和过氧化氢酶(CAT)的水平。T2DM小鼠的肝脏和胰腺病理形态也发生了明显改善。即BL可通过调节T2DM小鼠糖脂代谢、氧化应激和炎症因子的水平,降低T2DM小鼠FBG。同时,本文进行了体外验证蛋白质组学的研究,(1)探索BL对PI-3K/Akt信号通路相关蛋白表达及GLUT4 m RNA转录的影响。(2)采用PI-3K通路抑制剂渥曼青霉素进一步反向验证BL对PI-3K/Akt信号通路的影响。结果显示,BL可增加PI-3K/Akt胰岛素信号通路相关蛋白的表达,促进GLUT4从细胞质向细胞膜的转位。据此推测,BL通过激活PI-3K/Akt信号通路,调节葡萄糖转运,改善IR。为了探索BL通过抗炎改善脂肪细胞IR的作用机制,本文(1)采用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,探索BL对RAW264.7细胞炎症的影响。收集给药后的细胞上清液,使用ELISA试剂盒和一氧化氮(NO)试剂盒,检测BL对LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中NO、COX-2、i NOS、TNF-α和IL-6含量的影响。使用实时荧光定量PCR法检测BL对TLR4介导的MYD88和TIRF m RNA转录的影响。Western blotting法检测BL对MYD88下游信号通路NF-κB和MAPK信号中相关蛋白以及COX-2和i NOS蛋白表达水平的影响。免疫荧光法检测BL对LPS诱导的RAW264.7细胞内NF-κB p65蛋白核移位的影响。流式细胞术检测BL对LPS诱导的RAW264.7细胞中ROS含量的影响。(2)建立脂肪细胞胰岛素抵抗炎症模型,采用Transwell小室法检测BL对IR脂肪细胞招募RAW264.7细胞能力的影响。采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测BL对TNF-α诱导的脂肪细胞趋化因子MCP-1和MIP-1α以及炎症因子COX-2和IL-6 m RNA转录和分泌水平的影响。使用Western blotting法探索BL对TNF-α诱导的IR炎症信号通路NF-κB、JNK和SOCS-3相关蛋白表达的影响。结果显示,BL可通过抑制TLR4介导的MYD88和TIRF m RNA的转录及MYD88下游信号通路NF-κB和MAPK中相关蛋白的表达,抑制LPS诱导的NF-κB p65蛋白核移位,进而抑制RAW264.7细胞炎症因子的分泌,最终发挥抗炎的作用。BL显著抑制TNF-α诱导的脂肪细胞炎症因子和趋化因子的分泌,进而抑制RAW264.7细胞向IR脂肪细胞的浸润。BL还可抑制IR炎症信号通路NF-κB、JNK和SOCS-3相关蛋白的表达。即BL可通过抑制NF-κB、JNK和SOCS-3炎症信号通路,发挥抗炎改善IR的作用。综上所述,BL可通过调节T2DM小鼠糖脂代谢、氧化应激和炎症因子的水平,降低T2DM小鼠的FBG。BL可通过激活PI-3K/Akt信号通路、减弱RAW264.7细胞炎症和抑制IR炎症信号通路NF-κB、JNK和SOCS-3相关蛋白的表达,改善IR。