【摘 要】
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目的： 比较去白细胞富血小板血浆(P-PRP)与含白细胞富血小板血浆(L-PRP)对兔椎间盘髓核来源间充质干细胞(NPMSCs)增殖、分化、细胞外基质和NF-κB信号通路激活的影响.
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目的： 比较去白细胞富血小板血浆(P-PRP)与含白细胞富血小板血浆(L-PRP)对兔椎间盘髓核来源间充质干细胞(NPMSCs)增殖、分化、细胞外基质和NF-κB信号通路激活的影响. 方法： 实验选取24只雌性,6-8个月龄,体重3-4kg新西兰大白兔.每只大白兔分别抽取30ml动脉血,随机分为对照组、P-PRP组和L-PRP组.随后提取兔椎间盘髓核来源间充质干细胞并鉴定.选取P2NPMSCs在transwell细胞小室中与对应的不同浓度(0%、5%、10%和20%Vol/Vol)的PRPs(P-PRP或L-PRP)共培养三天后,CCK-8检查各组细胞增殖率.再选取各组P2细胞,分别加入各组对应的培养基(普通培养基、10%P-PRP、10%L-PRP)共培养.14天后,使用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)测定各组细胞MSCs干性基因(Oct4,Nanog)、髓核细胞相关基因(CollagenⅡ,Aggrecan)、炎症因子(TNF-α,IL-1β)以及基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-13)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定TNF-α、IL-1β、MMP-1和MMP-13浓度;Western Blot检测NF-κB/p65、CollagenⅡ以及Aggrecan蛋白表达;免疫荧光实验检测各组细胞CollagenⅡ以及Aggrecan蛋白表达. 结果： NPMSCs与PRPs共培养后,其增殖率表现出对PRPs剂量依赖性,其中在PRPs浓度10%时细胞增殖率最大(P<0.05).共培养两周后,实验组(P-PRP组或L-PRP组)细胞形态由纺锤形样细胞逐渐转变成瘦长梭形髓核样细胞,同时,实验组干细胞标志基因(Oct-4,Nanog)的表达是对照组的30%,而髓核细胞胞相关基因(CollagenⅡ,Aggrecan)的表达,是对照组3至4倍(P<0.05).L-PRP中白细胞和炎症因子浓度(TNF-α,IL-1β)明显高于P-PRP组(P<0.05).与P-PRP组相比,L-PRP组细胞中炎症因子(TNF-α,IL-1β)、基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-13)以及NF-κB p65表达明显增多(P<0.05).P-PRP组细胞外基质相关蛋白(CollagenⅡ,Aggrecan)表达明显高于L-PRP组(P<0.05). 结论： P-PRP和L-PRP均可以促进NPMSCs增殖并诱导其成髓核样细胞分化,剔除PRP中白细胞可以减少炎症反应,避免细胞NF-κB信号通路的激活以及抑制细胞分解代谢反应.
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