本课题以具有可靠镇痛作用的中药复方痛必定注射剂为施加因素,采用神经电生理及细胞膜片钳技术,通过对痛觉神经细胞离子通道的研究,确定中药的作用靶点,明确其镇痛机理。 实验分为五个部分。 实验一,成功建立了慢性疼痛CCI动物模型,该模型具有慢性疼痛的病理生理学特征,现已被国际上广泛采用。 实验二,应用神经电生理技术,研究痛必定注射剂对于WDR神经元异常放电的影响。结果显示,痛必定注射剂可以抑制WDR神经元的C-反应放电数,延长C-反应出现潜伏期,并抑制wind up现象。 实验三、四、五,分别应用膜片钳技术,研究痛必定注射剂对于DRG细胞膜钾、钙、钠离子通道的影响。结果显示,痛必定注射剂可以激活DRG细胞膜的延迟整流钾电流；抑制钙电流,并且通过交叉给药的实验设计,发现痛必定有选择的作用于N型钙离子通道；对于钠电流没有明显作用。 由此可知,痛必定注射剂的镇痛机理为,激活神经细胞膜钾离子通道、抑制N型钙离子通道,从而使细胞膜电位趋于稳定,降低了兴奋性,从而减少了痛觉神经传导通路中的神经异常放电。 通过本项研究,可以初步认为活血祛瘀、行气止痛的中药复方制剂的客观作用靶点之一可能与外周神经节的钾、钙离子通道有密切的关系。