研究背景骨肉瘤是一种最常见的原发性恶性骨肿瘤,主要好发于青少年及年轻人,其恶性程度高,早期即可转移,预后很差。单纯手术治疗其治愈率仅有15%-20%,自上世纪70年代采用有效的辅助化疗或新辅助化疗以来,特别是新辅助化疗结合保肢术的开展,大大提高了骨肉瘤患者的5年生存率和生活质量,5年生存率可达60%。但临床上约有30-40%的骨肉瘤患者是化疗耐药者,不但容易发生肿瘤转移,而且即使完整切除肿瘤也无法改善其预后。因此,我们急需更加深入去研究骨肉瘤的分子机制,寻找治疗骨肉瘤的新靶点。STAT3作为STATs家族的一员,最近被发现在不同类型癌症的进展中发挥着重要作用。STAT3的激活可在癌细胞增殖、分化、凋亡、转移、炎症、免疫、细胞存活和血管生成过程中调节多种基因功能。STAT3在肿瘤发生发展、化疗耐药和放射耐药过程中发挥着重要作用,抑制STAT3激活已成为症癌症治疗的一个蛋白质靶点。micro RNA（微小RNA,miRNA）是一类长约18-25个核苷酸的内源性非编码核苷酸,其不具有开放阅读框架,通过与目标m RNA的3’或者5’的非编码区核苷酸以碱基配对的方式结合,形成沉默复合体,阻碍甚至降解m RNA翻译的蛋白质,从而调控目的基因的表达。已有许多研究表明,各种miRNA的失调与肿瘤的发生、进展和复发密切相关。miR-320b是一种具有抑癌作用的微小RNA,在许多恶性肿瘤中低表达,如胰腺癌、乳腺癌及胃肠道肿瘤,过表达miR-320b可以抑制这些肿瘤增殖、转移,减少其化疗耐药性。目前针对miR-320b与骨肉瘤与的研究较少,我们通过检索miRDB、Targetscan、Target Miner等数据库,预测到STAT3是miR-320b的结合位点,但是在骨肉瘤中它们之间的相互作用并不清楚。因此有必要进一步探讨骨肉瘤中miR-320b与STAT3的关系,并研究两者之间的调节机制。研究目的本文旨在阐述miR-320b对骨肉瘤的生长、转移的调节作用,并探讨miR-320b通过靶向结合STAT3,抑制骨肉瘤进一步进展,为骨肉瘤的临床诊断和治疗提供新的靶点。研究方法1、通过q RT-PCR检测骨肉瘤组织与癌旁组织,骨肉瘤细胞与正常成骨细胞中miR-320b的RNA含量。2、采用miR-320b minics对骨肉瘤细胞进行转染,通过CCK8、平板克隆、Ed U实验来检测过表达miR-320b对骨肉瘤细胞增殖的影响,通过检测侵袭迁移相关蛋白、进行划痕、Transwell实验来验证对肿瘤转移的影响。3、通过miRDB、Targetscan、Target Miner等数据库预测miR-320b与STAT3之间的结合关系,并通过双荧光素酶实验验证。4、同时对骨肉瘤细胞转染miR-320b minics、p-STAT3或者miR-320b inhibitor、sh-STAT3,观察STAT3蛋白表达的变化以及CCK8、Transwell结果的变化,检测miR-320b是否通过STAT3影响骨肉瘤的生长和转移。5、利用过表达miR-320b的骨肉瘤细胞进行裸鼠移植瘤及尾静脉注射实验,观察miR-320b在体内实验骨肉瘤对生长和转移的影响。研究结果1、荧光定量PCR结果证实骨肉瘤组织与细胞中miR-320b的RNA表达水平对比癌旁组织与成骨细胞明显降低。2、miR-320b minics能显著增加骨肉瘤细胞中miR-320b的RNA表达水平,并且上调miR-320b表达的骨肉瘤细胞的增殖及转移能力显著被抑制。3、miRDB数据库中的结果显示miR-320b与STAT3靶向结合,并且双荧光素酶实验也证明了miR-320b与STAT3是直接靶向结合。4、对骨肉瘤细胞转染STAT3上调质粒能够逆转因上调miR-320b而引起来的STAT3表达降低以及生长、转移能力的减弱,反之亦然。5、上调骨肉瘤细胞miR-320b的表达,裸鼠的移植瘤体积和重量明显小于对照组,并且肺转移的发生率也明显降低。结论miR-320b可以抑制骨肉瘤细胞的生长和转移的生物学功能,作为骨肉瘤发生发展中的一个重要调节因子,其调节能力使通过靶向结合下调STAT3来实现的。我们的研究结果提示miR-320b是治疗骨肉瘤的潜在靶点,为治疗骨肉瘤提供新的思路。