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目的:本研究旨在从TMAO肠道菌群代谢途径分析补脾胃泻阴火升阳汤干预2型糖尿病大血管病变的作用机理。材料与方法:选取健康雄性Hartley-豚鼠36只,所选豚鼠体重控制在300~400g范围内,随机分为空白组(n=6),模型组(n=14)和干预组(n=16),空白组豚鼠使用普通饲料喂养,模型组与干预组豚鼠进行2型糖尿病合并动脉粥样硬化豚鼠造模:腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)联合高脂饮食喂养,获取豚鼠背中足静脉血液,使用血糖仪测定血糖数值,空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)高于9.0mmol/L的样本为合格,剥离出豚鼠主动脉弓,进行苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色,观察组织形态学变化,模型组与干预组豚鼠血管壁层次不清,内膜粗糙、不规则增厚,内皮细胞脱落,视为造模成功。造模成功后给予药物干预,干预组灌胃补脾胃泻阴火升阳汤,空白组与模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续灌胃6周后处死,造模过程中及后续取样过程中豚鼠因STZ耐受差、灌胃手法不当等原因死亡,或者豚鼠血糖不达标而致样本脱落,最终得到样本:空白组(n=6),模型组(n=7),干预组(n=9)。获取主动脉弓,进行HE染色,观察组织形态学改变;获取豚鼠结肠内容物,进行16S r DNA测序,应用生物信息学分析肠道菌群多样性及结构差异;获取豚鼠血清,使用全自动生化分析仪检测血脂四项水平,即总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C),并统计分析各组差异,使用ELISA试剂盒检测及统计分析各组间氧化三甲胺(Trimethylamine oxide,TMAO)、细胞间黏附因子-1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、超敏c反应蛋白(Hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的差异。结果:(1)HE染色切片镜下观察:空白组豚鼠主动脉弓部血管壁层次清晰,内膜平滑且完整,能够观察到整齐排列的内皮细胞,内皮下未见脂质沉积、泡沫细胞聚集和胶原纤维增生,中膜平滑肌细胞呈现整齐排列,没有萎缩以及增生,外膜形态保持正常;模型组豚鼠主动脉弓部血管壁层次不清,内膜粗糙且有不规则的增厚,内皮细胞脱落,内皮下能够观察到脂质沉积和平滑肌细胞增生,中膜平滑肌细胞出现排列紊乱;干预组豚鼠主动脉弓部血管壁层次大体清晰,内膜有轻度增厚,内皮下能够观察到散在的脂质沉积,平滑肌细胞增生不明显,中膜平滑肌细胞排列基本整齐。(2)经过Alpha多样性分析能够发现,和空白组相比,模型组及干预组的肠道菌群物种多样性方面显著降低,模型组与干预组在肠道菌群多样性上比较无显著差异。经过Anosim分析与MRPP分析得出,三组的肠道菌群结构两两相比均存在显著差异,但干预组的菌群结构更接近于空白组。经LEf Se分析与组间物种差异heatmap图可知,与空白组相比,模型组的Arthrobacter、Solirubrobacter、lleibacterium、Alistipes、Faecalibacterium(节杆菌属、梭菌属、回肠杆菌属、另枝菌属、粪杆菌属)菌群丰度明显下降(P<0.05),Ruminococcus(瘤胃球菌属)菌群丰度显著下降(P<0.01),Methanobrevibacter、UCG-005、Lachnospiraceae_NK4A136_group、Colidextribacter(甲烷短杆菌属、UCG-005菌属、毛螺菌科NK4A136组、大肠埃希菌属)菌群丰度显著升高(P<0.05)。与模型组相比,干预组的UCG-005菌属、Colidextribacter(大肠埃希菌属)、Papilibacter、Desulfovibrio(脱硫弧菌属)菌群丰度显著下降(P<0.05),且与空白组比较没有明显差异(P>0.05);干预组的Faecalibacterium(粪杆菌属)、Ruminococcus(瘤胃球菌属)菌群丰度显著升高(P<0.05),且与空白组比较无统计学差异(P>0.05)。(3)血脂四项水平比较:与空白组比较,模型组豚鼠的TC、TG以及LDL-C水平都有显著升高(P<0.05),干预组的LDL-C水平显著升高(P<0.05),而干预组的TC、TG水平无统计学差异(P>0.05);与模型组相比,干预组的TC、TG、LDL-C水平显著降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组和干预组的HDL-C水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,干预组的HDL-C水平显著升高(P<0.05)。(4)TMAO水平比较:与空白组比较,模型组TMAO水平明显升高(P<0.05),干预组TMAO水平无统计学差异(P>0.05);与模型组相比,干预组TMAO水平明显降低(P<0.05)。(5)氧化应激指标SOD、MDA比较:与空白组比较,模型组和干预组的SOD浓度显著降低(P<0.05),模型组MDA浓度显著升高(P<0.05),干预组MDA浓度无统计学差异(P>0.05);与模型组相比,干预组的SOD浓度显著升高(P<0.05),MDA浓度显著降低(P<0.05)。(6)炎症标志物ICAM-1、VCAM-1、IL-6、hs-CRP比较:与空白组比较,模型组的ICAM-1、VCAM-1、IL-6、hs-CRP浓度显著升高(P<0.05),干预组的ICAM-1、VCAM-1浓度无统计学差异(P>0.05),干预组的IL-6、hs-CRP浓度显著升高(P<0.05);与模型组相比,干预组的ICAM-1、VCAM-1、IL-6、hs-CRP浓度显著下降(P<0.05)。结论:(1)2型糖尿病合并动脉粥样硬化豚鼠体内肠道菌群物种多样性及结构存在显著改变,肠道菌群代谢产物TMAO水平明显升高。(2)补脾胃泻阴火升阳汤灌胃干预后,可以显著改善豚鼠的肠道菌群结构,有效降低致病菌属UCG-005菌属、Colidextribacter(大肠埃希菌属)、Papilibacter、Desulfovibrio(脱硫弧菌属)的菌群丰度,增加有益菌属Faecalibacterium(粪杆菌属)、Ruminococcus(瘤胃球菌属)的菌群丰度。(3)补脾胃泻阴火升阳汤灌胃干预后,显著降低豚鼠的血清TMAO水平,调节血脂,降低TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,提升抗氧化能力,增加SOD水平,降低MDA水平,改善炎症反应,降低血清炎症标志物ICAM-1、VCAM-1、IL-6和hs-CRP的水平。(4)补脾胃泻阴火升阳汤能够降低2型糖尿病大血管病变的发生风险,其机制可能与其能够调控TMAO肠道菌群代谢途径有关。