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第一部分GDM患者与正常孕妇的临床标本中chemerin、PPARγ的表达差异
【目的】
研究妊娠期糖尿病(GDM )患者和正常足月孕妇的临床标本中趋化因子chemerin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达差异及意义。
【方法】
收集GDM患者和正常足月孕妇剖宫产分娩时的胎盘组织、皮下脂肪组织、脐带血和外周血标本。利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量分析脐带血和外周血血浆中chemerin的含量；免疫组织化学法检测胎盘组织和皮下脂肪组织中chemerin的表达情况；并用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验分别检测PPARγ在胎盘组织中的表达情况。
【结果】
1.GDM患者脐带血血浆chemerin的浓度比外周血的高，差异有统计学意义(p<0.05)；与正常孕妇相比，GDM患者血浆chemerin水平升高，但差异无统计学意义；
2.与正常孕妇相比，GDM患者胎盘组织和皮下脂肪组织中chemerin的表达均升高(p<0.01)；
3.与正常孕妇相比，GDM患者的胎盘中PPARγ的蛋白和mRNA表达水平均减少，差异均有统计学意义(p<0.05)。
【结论】
与正常孕妇相比，GDM患者胎盘和皮下脂肪组织中chemerin表达较高，而胎盘中PPARγ水平较低；GDM患者脐带血中升高的chemerin可能部分来源于胎盘组织的分泌。
第二部分细胞模型中PPARγ激动剂调控chemerin改善胰岛素抵抗的机制研究
【目的】
探究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对趋化因子chemerin及其受体的影响以及外源性重组人chemerin对胰岛素信号通路关键分子的影响，阐明chemerin的受体在PPARγ激动剂改善胰岛素抵抗中的作用。
【方法】
采用多篇文献报道的高糖细胞模型，结合人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/SVneo细胞，构建GDM胎盘滋养细胞模型；利用细胞免疫荧光和WesternBlot检测chemerin、类趋化因子受体1(CMKLR1)和G蛋白偶联受体1(GPR1)在HTR-8/SVneo细胞中的表达情况；RT-qPCR实验检测100ng/mL重组人chemerin以及激活或抑制PPARγ对胰岛素通路信号分子磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶Bbeta(AKT2)和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的mRNA表达水平的影响；WesternBlot实验检测PPARγ激动剂(罗格列酮和GW1929)对chemerin及两个受体的影响；采用小干扰RNA(si-RNA)技术分别沉默CMKLR1、GPR1基因并通过WesternBlot实验研究chemerin的受体在PPARγ激动剂改善胰岛素抵抗中的作用机制。
【结果】
1.Chemerin和CMKLR1、GPR1均在高糖培养的HTR-8/SVneo细胞中表达；
2.与对照组相比，100ng/mL的重组人chemerin对胰岛素通路信号分子PI3K、AKT2和MAPK1的mRNA水平有明显的上调作用(p<0.05)；
3.与对照组相比，PPARγ激动剂罗格列酮组PI3K和AKT2的mRNA水平升高，PPARγ激动剂GW1929组PI3K和MAPK1的mRNA表达增加，PPARγ抑制剂GW9662组AKT2和MAPK1的mRNA水平降低，差异均有统计学意义(p<0.05)；4.与对照组相比，PPARγ激动剂罗格列酮组PPARγ和GPR1的蛋白表达量增加(p<0.05)，PPARγ激动剂GW1929组PPARγ、chemerin和CMKLR1的蛋白表达水平上升(p<0.01)；
5.与si-CMKLR1组相比，si-CMKLR1+PPARγ激动剂(罗格列酮或GW1929)仍然可以提高ERK2磷酸化蛋白的水平(p<0.01)，但对PI3Kp110β蛋白和AKT2磷酸化蛋白的表达均无促进作用，提示沉默CMKLR1对PPARγ激动剂增强PI3K-AKT通路可能有影响；
6.与si-GPR1组相比，si-GPR1+PPARγ激动剂(罗格列酮或GW1929)仍然可以升高PI3Kp110β和AKT2总蛋白的水平(p<0.05)，但对ERK2磷酸化蛋白不具有激活作用，提示GPR1在MAPK(ERK1/2)通路激活过程中可能有重要作用。
【结论】
Chemerin对胰岛素信号通路的激活可能有促进作用，PPARγ激动剂可能通过提高chemerin及其受体CMKLR1、GPR1的表达改善胰岛素抵抗。
【目的】
研究妊娠期糖尿病(GDM )患者和正常足月孕妇的临床标本中趋化因子chemerin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达差异及意义。
【方法】
收集GDM患者和正常足月孕妇剖宫产分娩时的胎盘组织、皮下脂肪组织、脐带血和外周血标本。利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量分析脐带血和外周血血浆中chemerin的含量；免疫组织化学法检测胎盘组织和皮下脂肪组织中chemerin的表达情况；并用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验分别检测PPARγ在胎盘组织中的表达情况。
【结果】
1.GDM患者脐带血血浆chemerin的浓度比外周血的高，差异有统计学意义(p<0.05)；与正常孕妇相比，GDM患者血浆chemerin水平升高，但差异无统计学意义；
2.与正常孕妇相比，GDM患者胎盘组织和皮下脂肪组织中chemerin的表达均升高(p<0.01)；
3.与正常孕妇相比，GDM患者的胎盘中PPARγ的蛋白和mRNA表达水平均减少，差异均有统计学意义(p<0.05)。
【结论】
与正常孕妇相比，GDM患者胎盘和皮下脂肪组织中chemerin表达较高，而胎盘中PPARγ水平较低；GDM患者脐带血中升高的chemerin可能部分来源于胎盘组织的分泌。
第二部分细胞模型中PPARγ激动剂调控chemerin改善胰岛素抵抗的机制研究
【目的】
探究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对趋化因子chemerin及其受体的影响以及外源性重组人chemerin对胰岛素信号通路关键分子的影响，阐明chemerin的受体在PPARγ激动剂改善胰岛素抵抗中的作用。
【方法】
采用多篇文献报道的高糖细胞模型，结合人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/SVneo细胞，构建GDM胎盘滋养细胞模型；利用细胞免疫荧光和WesternBlot检测chemerin、类趋化因子受体1(CMKLR1)和G蛋白偶联受体1(GPR1)在HTR-8/SVneo细胞中的表达情况；RT-qPCR实验检测100ng/mL重组人chemerin以及激活或抑制PPARγ对胰岛素通路信号分子磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶Bbeta(AKT2)和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的mRNA表达水平的影响；WesternBlot实验检测PPARγ激动剂(罗格列酮和GW1929)对chemerin及两个受体的影响；采用小干扰RNA(si-RNA)技术分别沉默CMKLR1、GPR1基因并通过WesternBlot实验研究chemerin的受体在PPARγ激动剂改善胰岛素抵抗中的作用机制。
【结果】
1.Chemerin和CMKLR1、GPR1均在高糖培养的HTR-8/SVneo细胞中表达；
2.与对照组相比，100ng/mL的重组人chemerin对胰岛素通路信号分子PI3K、AKT2和MAPK1的mRNA水平有明显的上调作用(p<0.05)；
3.与对照组相比，PPARγ激动剂罗格列酮组PI3K和AKT2的mRNA水平升高，PPARγ激动剂GW1929组PI3K和MAPK1的mRNA表达增加，PPARγ抑制剂GW9662组AKT2和MAPK1的mRNA水平降低，差异均有统计学意义(p<0.05)；4.与对照组相比，PPARγ激动剂罗格列酮组PPARγ和GPR1的蛋白表达量增加(p<0.05)，PPARγ激动剂GW1929组PPARγ、chemerin和CMKLR1的蛋白表达水平上升(p<0.01)；
5.与si-CMKLR1组相比，si-CMKLR1+PPARγ激动剂(罗格列酮或GW1929)仍然可以提高ERK2磷酸化蛋白的水平(p<0.01)，但对PI3Kp110β蛋白和AKT2磷酸化蛋白的表达均无促进作用，提示沉默CMKLR1对PPARγ激动剂增强PI3K-AKT通路可能有影响；
6.与si-GPR1组相比，si-GPR1+PPARγ激动剂(罗格列酮或GW1929)仍然可以升高PI3Kp110β和AKT2总蛋白的水平(p<0.05)，但对ERK2磷酸化蛋白不具有激活作用，提示GPR1在MAPK(ERK1/2)通路激活过程中可能有重要作用。
【结论】
Chemerin对胰岛素信号通路的激活可能有促进作用，PPARγ激动剂可能通过提高chemerin及其受体CMKLR1、GPR1的表达改善胰岛素抵抗。