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第一部分c-Abl在癫痫中的作用[目 的]癫痫（Epilespy,EP）是神经系统最常见的慢性疾病之一,该病的发病机制十分的复杂,目前仍不清楚。本课题组前期的研究发现,在颞叶癫痫患者和癫痫动物模型中,c-Abl蛋白和磷酸化c-Abl蛋白的表达均上调,但c-Abl在癫痫发生发展中的作用仍然不清。本部分实验旨在研究c-Abl在癫痫中的作用。[方 法]（1）选取健康雄性SD大鼠（6-8周,200±50g）并随机分为c-Abl慢病毒沉默（LV-shRNA）组和空载体（LV-Empty）组,采用脑立体定位技术对其进行干预,在干预后1天、3天和7天取材进行Western Blot和免疫荧光方法检测转染效率。随后,再次利用慢病毒对SD大鼠进行干预,在干预1周后,腹腔注射氯化锂（127mg/kg）,18-20h后注射匹罗卡品（50mg/kg）,观察两组行为学差异,造模后35天取材进行NeuN染色、Tunel染色和FJB染色,以检测神经元变性和丢失情况。（2）将健康雄性SD大鼠予以腹腔注射氯化锂（127 mg/kg）溶液,于18-20h后再注射匹罗卡品（50 mg/kg）,按照Racine分级选取癫痫发作级别在4级及以上的大鼠入组。造模成功后3天,将大鼠随机分为抑制剂组和生理盐水组,分别予以腹腔注射c-Abl特异性抑制剂（STI-571）（30mg/kg/d）和同等剂量的生理盐水,连续注射两周。造模后21-35天观察大鼠的自发性痫性发作的频率,于35天后取材,检测内容同上。（3）选取SD雄鼠予以腹腔注射戊四氮（40mg/kg/d）溶液,将大鼠随机分为抑制剂组（STI）和生理盐水（NS）组,分别予以腹腔注射c-Abl特异性抑制剂（STI-571）（30mg/kg/d）和同等剂量的生理盐水,连续注射两周。观察两组癫痫发作的潜伏期及严重程度。[结 果]1.慢病毒c-Abl双侧海马立体定位注射后,海马c-Abl表达下降。与相应时间点对照组相比,c-Abl的OD比值在慢病毒注射后3天和7天组明显降低（p＜0.05）,7天组降低最明显。免疫荧光结果显示EGFP阳性表达位于海马,尤其是CA1 区。2.在匹罗卡品癫痫模型慢性期,癫痫平均发作频率LV-shRNA组较空载体组（LV-Empty）明显减少（p＜0.05）,（STI-571）组较生理盐水组（NS组）发作频率显著减少（p＜0.05）;3.NeuN染色显示,与LV-Empty组相比,LV-shRNA组NeuN 阳性细胞数明显增多（p＜0.05）;与NS组相比,STI组NeuN阳性细胞数明显增多;提示下调c-Abl可以减少癫痫中的神经元丢失;4.FJB染色显示,与LV-Empty组相比,LV-shRNA组FJB阳性细胞数明显减少（p＜0.05）;与NS组相比,STI组FJB阳性细胞数明显减少;提示下调c-Abl可以减少癫痫中的神经元变性;5.Tunel染色显示LV-shRNA组与慢病毒空载体组（LV-Empty）相比,Tunel阳性细胞较少（p＜0.05）;提示下调c-Abl可以减少癫痫中的神经元凋亡;6.在戊四氮化学点燃模型中,与NS组相比,STI组的平均点燃潜伏期显著延长（p＜0.05）,平均癫痫发作评分降低（p＜0.05）;提示c-Abl抑制剂可以减轻癫痫发作严重程度并降低癫痫发作易感性。[结 论]1.慢病毒c-Abl海马立体定位注射后可下调c-Abl的表达,转染在注射后3天有效,7天达到高峰;2.在匹罗卡品和戊四氮诱导的癫痫模型中,海马c-Abl的抑制能够减轻癫痫发作的严重程度并降低癫痫发作的易感性;3.下调c-Abl能够减轻癫痫后海马神经元凋亡、变性、丢失。第二部分c-Abl在癫痫中的可能作用机制[目的]进一步探讨c-Abl在癫痫中的可能作用机制。[方法]在匹罗卡品癫痫模型,利用c-Abl特异性抑制剂和慢病毒沉默两种不同的干预手段来进行干预,具体造模方法和分组同上一部分。于35天取材后,进行以下检测:（1）Western Blot:检测下调c-Abl后,其下游信号分子Cdk5和p-Cdk5的表达情况;（2）免疫组化:比较下调c-Abl后Cdk5和p-Cdk5的表达情况;（3）免疫荧光双标:观察c-Abl和Cdk5/p-Cdk5在海马CA1共表达情况。[结果]1.Western Blot结果显示,与NS组相比,STI组p-Cdk5的表达下调（p＜0.05）,但总Cdk5无明显变化（p＞ 0.05）;与Epilepsy组和LV-Empty组相比,LV-shRNA组p-Cdk5的表达下调（p＜0.05）,但总Cdk5无明显变化（p＞0.05）;2.免疫组化显示,与生理盐水组（NS组）相比,STI组p-Cdk5平均OD值显著降低（p＜0.05）,Cdk5平均OD值没有明显变化（p＞0.05）;与Epilepsy组和LV-Empty组相比,LV-shRNA组p-Cdk5平均OD值显著降低（p＜0.05）,Cdk5平均OD值没有明显变化（p＞0.05）;3.双免疫荧光标记法结果显示,在海马CA1区c-Abl和Cdk5/p-Cdk5的共表达。[结论]c-Abl可能通过调节Cdk5的活性参与癫痫的发生发展。