【摘 要】
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本课题采用冷水浸提醇沉法从白牛肝菌（Boletus edulis）中提取到了一种新多糖（BEP-1）,并对其结构和抗肿瘤活性进行了研究,为寻找新的抗乳腺癌药物提供理论依据。通过苯酚-硫酸法测得BEP-1中总糖含量为92.80%。BEP-1的高效液相色谱图呈一个单一对称的窄峰,根据葡聚糖标准曲线计算出其分子量为6.0×10~6 Da。BEP-1的离子色谱显示其由甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖
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本课题采用冷水浸提醇沉法从白牛肝菌（Boletus edulis）中提取到了一种新多糖（BEP-1）,并对其结构和抗肿瘤活性进行了研究,为寻找新的抗乳腺癌药物提供理论依据。通过苯酚-硫酸法测得BEP-1中总糖含量为92.80%。BEP-1的高效液相色谱图呈一个单一对称的窄峰,根据葡聚糖标准曲线计算出其分子量为6.0×10~6 Da。BEP-1的离子色谱显示其由甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖和木糖组成,比例为2.57:1.00:0.44:0.34:0.28:0.28,说明BEP-1是一种酸性多糖。结合红外、核磁、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化的实验结果可推测出BEP-1是一种含有α-型和β-型糖苷键的吡喃糖,主要的糖苷键类型是1,4-Glc,1,6-Gal,1,3-Man和1,3,6-Man。在对BEP-1的初级结构进行解析后,我们研究了BEP-1对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用。MTT结果显示BEP-1对MDA-MB-231和Ca761细胞的增殖抑制率呈时间和剂量依赖性,在BEP-1处理MDA-MB-231和Ca761细胞24 h后,IC50值分别为152.76μg/m L和134.55μg/m L。通过倒置荧光显微镜,扫描电镜,Hoechst 33258单染和Hoechst 33342/PI双染发现BEP-1使细胞出现了体积缩小、核质浓缩、核裂解、凋亡小体等典型的凋亡形态变化。Annexin V-FIFC/PI双染实验结果显示随着BEP-1浓度的增加MDA-MB-231和Ca761细胞的凋亡率分别从7.31%增加到42.15%,3.14%增加到63.32%。PI染色结果显示MDA-MB-231和Ca761细胞的周期分别被阻滞在S期和G0/G1期。罗丹明123染色和细胞活性氧实验结果表明在BEP-1的作用下MDA-MB-231和Ca761细胞的线粒体膜电位显著降低,细胞内活性氧含量显著增加,这说明BEP-1可能通过线粒体途径诱导这两种细胞凋亡。为了进一步验证其凋亡途径,我们通过蛋白质免疫印迹实验研究了BEP-1对MDA-MB-231和Ca761细胞凋亡相关蛋白表达的影响,发现抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,Cytochrome C被释放到细胞质激活了Caspase-9和Caspase-3,因此Cleaved-caspase-9和Cleaved-caspase-3的表达均有所上调。综上实验结果可知,BEP-1是通过线粒体凋亡通路诱导MDA-MB-231和Ca761细胞凋亡的。
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