【摘 要】
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【目的】复发性流产（Recurrent pregnancy loss,RPL）是常见的妊娠并发症,其发生与维生素D缺乏和母体免疫功能紊乱有关。维生素D具有免疫调节作用,其在母体血清中缺乏/不足与RPL的发生有关。然而,母胎界面维生素D的水平及其代谢与RPL的关系尚不是十分清楚。γδT细胞是一类有多种免疫功能的T细胞亚群,参与母胎界面免疫耐受的建立与维持,其亚群比例失衡或功能异常参与RPL的发生。然
【基金项目】
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国家科技部重点研发计划项目（No.2018YFC1003900,2018YFC1003904）；
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【目的】复发性流产（Recurrent pregnancy loss,RPL）是常见的妊娠并发症,其发生与维生素D缺乏和母体免疫功能紊乱有关。维生素D具有免疫调节作用,其在母体血清中缺乏/不足与RPL的发生有关。然而,母胎界面维生素D的水平及其代谢与RPL的关系尚不是十分清楚。γδT细胞是一类有多种免疫功能的T细胞亚群,参与母胎界面免疫耐受的建立与维持,其亚群比例失衡或功能异常参与RPL的发生。然而,导致母胎界面γδT细胞亚群比例失衡或功能异常的原因尚未阐明。本研究旨在探究早期正常妊娠（Normal pregnancy,NP）妇女（NP组）和RPL患者（RPL组）母胎界面维生素D的水平及其代谢与γδT细胞亚群比例的关系,并揭示维生素D对γδT细胞功能及与滋养层细胞对话的调节作用。【方法】采集NP组和RPL组绒毛组织和蜕膜组织,采用免疫化学发光法检测绒毛组织中25-（OH）VD3水平;采用免疫组织化学和Western blot方法检测绒毛组织中维生素D代谢酶（CYP27B1和CYP24A1）的表达和水平;采用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测蜕膜组织中γδT细胞亚群比例,并采用Pearson相关性分析方法分析绒毛组织中25-（OH）VD3水平与蜕膜γδT细胞亚群比例的相关性。采集早期妊娠自愿者外周血,分离单个核细胞,并体外诱导培养Vδ2+γδT细胞;外源性添加活性维生素D处理后,采用RT-q PCR和FCM技术检测Vδ2+γδT细胞中维生素D受体（Vitamin D receptor,VDR）、细胞因子和转录因子m RNA表达水平。此外,将维生素D预处理的Vδ2+γδT细胞与HTR-8/SVneo滋养层细胞系共培养,采用Ed U细胞增殖实验检测HTR-8/SVneo滋养层细胞系的增殖能力;使用维生素D处理的Vδ2+γδT细胞培养上清处理HTR-8/SVneo滋养层细胞系,采用划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测HTR-8/SVneo滋养层细胞系的迁移和侵袭能力。【结果】与NP组相比,RPL组绒毛组织中25-（OH）VD3水平明显增加（P＜0.01）,而CYP27B1（将25-（OH）VD3转化为1,25-（OH）2VD3的酶）的蛋白表达水平明显减少（P＜0.001）;免疫组化结果显示CYP27B1和CYP24A1在细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和绒毛柱中广泛表达;FCM结果显示:与NP组相比,RPL组蜕膜中Vδ2+γδT细胞比例明显增加（P＜0.05）,而Foxp3+Vδ2+γδT细胞（γδTreg细胞）比例明显减少（P＜0.001）;绒毛组织中25-（OH）VD3水平与蜕膜中Vδ2+γδT细胞比例呈正相关（r=0.496,P=0.014）,与蜕膜中γδTreg细胞比例呈负相关（r=-0.504,P=0.012）;外源性添加活性维生素D可上调Vδ2+γδT细胞中VDR m RNA和TGF-βm RNA表达水平,促进转录分子Foxp3表达,而下调IFN-γm RNA表达水平;此外,维生素D预处理的Vδ2+γδT细胞可增强HTR-8/SVneo滋养层细胞系的增殖能力,维生素D处理后的Vδ2+γδT细胞培养上清可增强HTR-8/SVneo滋养层细胞系的迁移和侵袭能力。【结论】维生素D可调节Vδ2+γδT细胞分化为γδTreg细胞,并调节γδT细胞与滋养层细胞间的对话,促进滋养层细胞的生物学功能;而RPL患者母胎界面存在维生素D代谢异常,表现为其关键代谢酶CYP27B1减少,导致活性维生素D合成减少,同时伴蜕膜中γδT细胞亚群比例失调,表现为促炎型Vδ2+γδT细胞比例增加,调节型γδTreg细胞比例减少。因此,母胎界面维生素D代谢异常和γδT细胞亚群失调可能参与RPL的发生。
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