研究目的:远志是我国传统常用中药材,药用历史悠久,具有安神益智、消肿祛痰等功效。研究表明,远志寡糖酯类成分具有抗抑郁、抗痴呆和神经保护等药理作用,但其抗焦虑作用和相关物质基础仍未清晰。酚类成分在远志中含量丰富,天然存在的酚类化合物具有普遍的抗焦虑活性,本课题所关注的远志寡糖酯类成分就多由酚类和糖构成,基于此,我们推测远志寡糖酯类成分亦具有抗焦虑作用,而其中的酚类成分可能是其在体内产生作用的效应成分。为验证这一假设,有必要对远志寡糖酯类成分的抗焦虑活性及体内代谢过程进行研究。因此,本课题首先采用经典的焦虑动物模型,探究远志寡糖酯类成分及其代表性成分3,6’-二芥子酰基蔗糖酯（DISS）是否具有抗焦虑活性;其次,以DISS为主要研究对象,揭示其体内代谢和吸收特征;最后,从神经递质的角度探究DISS可能的抗焦虑作用机制,旨在为远志寡糖酯类成分及DISS抗焦虑药物的开发利用提供参考。研究方法:1.采用50%乙醇加热回流提取远志药液,利用大孔吸附树脂柱层析技术,依次用水、30%乙醇溶液洗脱。收集30%乙醇洗脱液,回收溶剂并冷冻干燥,得到远志总寡糖酯提取部位（简称YZ-30%）。采用HPLC分析方法表征YZ-30%的化学组成,进一步建立UHPLC-Q-Exactive/MS方法鉴定YZ-30%的主要化学成分。最后采用高架十字迷宫实验（EPM）考察YZ-30%是否具有抗焦虑活性。2.ICR 小鼠灌胃给予 DISS（剂量分别为 0.75、1.5、3、6、12、24mg/kg）,1 天1次,连续3天,于末次给药30 min后进行旷场实验（OFT）和高架十字迷宫实验（EPM）,评价DISS的抗焦虑活性。3.雄性SD大鼠灌胃给予DISS（单次给药,100 mg/kg）,收集血浆或脑脊液样本,注入Thermo Scientific Q Exactive高分辨质谱仪进行分析,鉴定大鼠口服DISS后血浆中以及能够透过血脑屏障的代谢产物。4.优化样品前处理方法并建立一种快速、灵敏、可同时定量分析大鼠血浆中6种DISS活性代谢物的UPLC-MS/MS方法。在SD大鼠给药前及单次灌胃DISS（100 mg/kg）后 0.08、0.17、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5、8、12、24 h 采集血浆样本,前处理后采用三重四级杆液质联用仪进行分析,使用非房室模型描述DISS及其代谢物的药代动力学特征。5.通过分子对接初步判断DISS及其代谢物与酪氨酸羟化酶（TH）结合的可能性,采用DARTS技术结合Western blot实验对分子对接的结果作进一步的验证,从而初步阐明DISS抗焦虑的作用机制。研究结果:1.通过大孔吸附树脂柱层析技术分离YZ-30%的得率为7.88%。采用文献中提供的HPLC条件对YZ-30%进行分析,初步判断YZ-30%主要含有寡糖酯类成分。利用UHPLC-Q-Exactive/MS方法从YZ-30%中主要鉴定出了 4种寡糖酯和3种有机酸成分,包括DISS、远志糖苷A（TFSA）、西伯利亚远志糖A5（SA5）、西伯利亚远志糖A6（SA6）、对香豆酸（CA）、芥子酸（SA）、3,4,5-三甲氧基肉桂酸（TMCA）,说明YZ-30%不仅富含寡糖酯类成分,也包含有机酸类成分。最后采用EPM实验验证YZ-30%的抗焦虑活性,结果显示,与对照组相比,YZ-30%低、中、高剂量组的小鼠进入开放臂的次数明显增加,在开放臂中停留的时间也明显延长,说明YZ-30%具有显著抗焦虑活性,且具有剂量依赖性。2.OFT实验的结果显示6 mg/kg与12 mg/kg的DISS可延长小鼠在旷场中心区域停留的时间,6 mg/kg的DISS增加小鼠进入中心区域的次数。EPM实验的结果显示,给予1.5、3、6、12、24 mg/kg剂量的DISS可明显增加小鼠在开放臂停留的时间百分比,3、6、12 mg/kg剂量的DISS明显增多小鼠进入开放臂的次数百分比,表明DISS具有显著的抗焦虑活性。3.通过UHPLC-Q-Exactive/MS方法分析DISS给药后的大鼠血浆及脑脊液样品,结果从血浆样品中鉴定出DISS原型以及代谢物SA、TMCA、CA、3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯（TMCA-CH2）和对甲氧基肉桂酸（MA）,此外CA和MA也在空白血浆中存在;从含药脑脊液中鉴定出DISS原型及代谢物SA、MA、TMCA、TMCA-CH2,此外MA同样在空白脑脊液中被检出。4.样品前处理时,在进行蛋白沉淀的基础上加入除磷脂操作可明显减少基质效应。所有化合物分析方法的选择性、定量下限、线性、准确度和精密度、稀释可靠性、基质效应、稳定性均得到验证。使用非房室模型描述DISS及其代谢物的药代动力学特征,结果表明DISS给药后迅速吸收和消除;SA吸收最慢,在体内暴露水平最高,可能是DISS作用的主要活性形式;TMCA和MA消除最慢,可以长时间在大鼠体内维持一个低浓度水平。5.各化合物与TH分子对接的结果显示,MA和CA的结合能与酪氨酸相近,而DISS、TMCA、SA的结合能低于酪氨酸,表明这些化合物均可能与TH结合发挥作用。DARTS/Western Blot的实验结果显示,在1:100的酶解比例下（链霉蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶与裂解液总蛋白的比例）,随着DISS、SA、TMCA、CA浓度的升高,与之结合的TH含量增加,表现为蛋白条带逐渐增强,说明DISS、SA、TMCA、CA可以与TH特异性结合。研究结论:远志寡糖酯类成分具有抗焦虑活性,其中的代表性成分DISS抗焦虑活性显著。DISS以原型和代谢为SA、TMCA、TMCA-CH2、CA、MA等代谢物的形式进入体内,本研究描述了这些代谢物的药代动力学特征,其中,DISS和代谢物SA、TMCA、MA均可透过血脑屏障到达脑部,它们可能是DISS产生抗焦虑作用的物质基础。而DISS、SA、TMCA、CA与TH的特异性结合说明了这些化合物可能的作用机制,即进入脑内影响或参与酪氨酸代谢通路。这项工作对于理解和应用远志寡糖酯类成分以及抗焦虑药物的开发均具有重要意义。