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目的:本研究旨在探讨微小RNA(microRNA,miR)-142-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响及其作用机制,以期为NSCLC的诊断与治疗寻找新的靶点以及提供理论基础。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技术检测35例NSCLC组织标本、癌旁正常组织以及人肺癌细胞株的miR-142-3p和RHOBTB3 mRNA表达水平。采用Western blot检测RHOBTB3在肺癌组织和癌旁正常组织中的蛋白水平表达水平。统计并分析肺癌组织、细胞与正常组织细胞中miR-142-3p和RHOBTB3的表达差异。选取肺癌细胞株A549为后续实验细胞株,通过细胞转染分别构建对照组(A549/NC)细胞株,miR-142-3p过表达组(A549/miR-142-3p)细胞株,RHOBTB3过表达组(A549/NC+RHOBTB),共转过表达组(A549/miR-142-3p+RHOBTB)。使用qRT-PCR检测 4 组细胞中miR-142-3p表达效率,qRT-PCR以及Western blot检测四组细胞中RHOBTB3 mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验以及细胞克隆形成实验检测4组细胞的增殖能力的变化情况。通过应用在线预测软件对miR-142-3p靶基因预测数据库进行分析,设计并构建包含RHOBTB3的3’-非翻译区(3’-UTR)报告质粒pMIR/WT和结合位点突变的报告质粒pMIR/MUT;通过双荧光素酶报告基因实验验证RHOBTB3是miRNA-142-3p的直接靶基因。结果(1)与癌旁正常组织相比较,非小细胞肺癌组织中miR-142-3p表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与匹配的癌旁正常组织相比,RHOBTB3在癌组织中的表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与正常支气管上皮细胞HBE相比较,肺癌细胞株A549中miR-142-3p表达水平显著降低,且RHOBTB3的表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);通过筛选,选取A549细胞株成为后续实验细胞株。(3)转染后miR-142-3p在A549/miR-142-3p组中表达量相对于A549/NC组显著上调(P<0.05);miR-142-3p在A549/miR-142-3p+RHOBTB3 组表达量相对于A549/NC+RHOBTB组明显上调(P<0.05);提示转染LV-miR-142-3p慢病毒载体可显著上调肺癌A549细胞中miR-142-3p的表达量。(4)转染后RHOBTB3在A549/NC+RHOBTB3组表达量相对A549/NC组明显上调(P<0.05);RHOBTB3 在A549/miR-142-3p+RHOBTB3 组表达量相对A549/miR-142-3p明显上调(P<0.05);提示转染RHOBTB3表达质粒可以明显提高A549细胞中RHOBTB3表达量。(5)A549/miR-142-3p组RHOBTB3 相对表达水平低于A549/NC(P<0.05)。A549/miR-142-3p+RHOBTB3 组 RHOBTB3 表达水平低于 A549/NC+RHOBTB3 组(P<0.05),提示过表达miR-142-3p后A549细胞中RHOBTB3的表达下调,miR-142-3p过表达可能会抑制RHOBTB3的表达。(6)CCK-8及细胞克隆形成实验结果显示,相较于A549/NC组,A549/miR-142-3p组细胞增殖能力明显下降(P<0.05),且相较于A549/NC+RHOBTB3组,A549/miR-142-3p+RHOBTB3组细胞增殖能力下降(P<0.05),提示过表达miR-142-3p能显著抑制A549细胞的增殖能力。而A549/NC+RHOBTB3组细胞增殖能力相较于A549/NC显著增加(P<0.05);A549/miR-142-3p+RHOBTB3 组细胞增殖能力相对于A549/miR-142-3p组明显增加,统计学有意义(P<0.05),提示过表达RHOBTB3可以部分逆转miR-142-3p对A549细胞的增殖抑制影响。(7)利用在线软件预测发现RHOBTB3 mRNA的3’-非翻译区(3’-UTR)与miR-142-3p具有结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-3p+pMIR/WT组荧光素酶活性(0.41±0.05)低于NC+pMIR/WT 组(1.01±0.12)(t=11.220,P<0.001),miR-142-3p+pMIR/MUT组荧光素酶活性(0.95±0.09)与NC+pMIR/MUT组(1.02±0.09)比较差异无统计学意义(t=1.322,P=0.216)。提示RHOBTB3是miR-142-3p的直接靶基因,miR-142-3p可能通过靶向调节RHOBTB3的表达水平进而影响A549细胞的增殖能力。结论1、miR-142-3p在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达下调,RHOBTB3在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达上调;2、miR-142-3p过表达能抑制肺癌细胞A549的增殖能力,并下调细胞中RHOBTB3的表达水平;3、RHOBTB3过表达可以部分逆转miR-142-3p过表达对肺癌细胞A549的增殖抑制作用;4、RHOBTB3是miR-142-3p的直接靶基因,miR-142-3p可能通过调控RHOBTB3进而影响肺癌A549细胞的增殖能力。