【摘 要】
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植物乳杆菌WCFS1的基因组上有两个命名为glmS的基因,分别是glmS1和glmS2。本实验室前期已经开展了对glmS1基因的研究,发现其具有GlmS（葡糖胺6磷酸合酶）的功能,本研究对glmS2基因开展研究,探究其是否也具有GlmS的功能。首先,通过Cre-loxP同源重组技术成功敲除了植物乳杆菌WCFS1菌株的glmS2基因,缺陷菌株命名为NZ5334,研究表明NZ5334菌株在常规MRS培
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植物乳杆菌WCFS1的基因组上有两个命名为glmS的基因,分别是glmS1和glmS2。本实验室前期已经开展了对glmS1基因的研究,发现其具有GlmS（葡糖胺6磷酸合酶）的功能,本研究对glmS2基因开展研究,探究其是否也具有GlmS的功能。首先,通过Cre-loxP同源重组技术成功敲除了植物乳杆菌WCFS1菌株的glmS2基因,缺陷菌株命名为NZ5334,研究表明NZ5334菌株在常规MRS培养基中生长良好,与野生菌株生长无明显差异。而后,选择实验室保藏的一株已敲除自身glmS基因的大肠杆菌BL21为宿主菌株重组表达glmS2基因。先后选择pET28a载体、含GST融合标签的pGST-4T-1载体和含MBP融合标签的pLS3009载体表达glmS2基因,只有最后一个重组融合蛋白GlmS2-MBP具有可溶性,SDS-PAGE图谱显示,在预期大小（82 KD）相同的位置出现条带。但是,glmS2重组表达菌株GLMS2-MBP与对应空载质粒的缺陷菌的生长没有显著性差异,在没有添加氨基葡糖的培养基中均不能生长。最后,选用分光光度计法和HPLC法两种方法均没有检测到GLMS2-MBP的GlmS活性。
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