鲤Romo1基因的克隆、鉴定及其表达研究

来源 :山东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:loveme2001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
活性氧调节基因Romo1是细胞内一类重要的供氧因子,它位于线粒体上并通过线粒体电子传递链复合物Ⅲ诱导线粒体ROS的产生。在生理条件下,Romo1维持细胞内ROS的稳态水平来保持机体内氧化还原平衡,同时促进老化细胞和癌细胞的凋亡,并且通过调节P27基因的表达,在细胞增殖中起重要的作用,此外该基因是细胞周期从G1期到S期所必须的。因此,Romo1对细胞的生长和生存起重要的作用。在外源性刺激下,如无血清状态和抗癌药物的刺激时,Romo1基因的表达量增加,进而增加细胞内ROS的水平以应对外源性刺激反应。  活性氧基团(Reactive oxygen species,ROS)是一类具有活性的含氧化合物,它主要是有机体在有氧代谢中通过线粒体电子传递链复合物Ⅰ和Ⅲ产生的。细胞内正常 ROS水平是在0.001μΜ和~0.7μΜ之间,过量的ROS通过抗氧化系统被除去进而来维持氧化还原体内平衡。ROS产量的失衡状态会改变细胞内氧化还原平衡状态,会对细胞和基因结构造成损坏,引起DNA破坏,促进癌症的发生。尽管ROS存在许多负面效应,但是适当的ROS的水平在细胞生长和生存中有重要作用,并且在参与固有免疫应答和适应性免疫应答的抗菌、消炎中具有重要意义。  近年来,国内外对于人类Romo1基因及其编码蛋白的研究取得了初步成果,但是在硬骨鱼中只在斑马鱼中有报道,在鲤鱼中关于Romo1基因的研究至今没有报道,并且虽然Romo1有多种功能,但是对于Romo1的免疫功能研究甚少,目前为止仅在七鳃鳗中研究过该基因的免疫功能,在鲤鱼中还未曾研究。  本研究首先对已报道的多个物种的Romo1基因cDNA序列进行比对,根据保守区设计引物利用反转录PCR和RACE方法,首次克隆得到鲤鱼(Cyprinus carpio.L)Romo1 cDNA全长序列。鲤鱼Romo1基因cDNA序列全长为480bp,包含112bp的5,-非编码区(5,-UTR),240bp的开放阅读框(ORF)及128bp的3,-非编码区(3,-URT)。其中鲤鱼Romo1 mRNA的ORF区编码79个氨基酸。运用Expasy的在线软件Protparam分析蛋白质的理化性质,结果显示Romo1蛋白质的理论分子量为8.3198KDa;理论等电点为9.89;SMART预测蛋白结构显示在氨基酸序列的第23-45位具有一个跨膜结构域,在21-40位氨基酸处具有overlop环状结构;其次用BioEdit7.0软件,将鲤鱼Romo1氨基酸序列与多个物种的Romo1氨基酸序列进行比对,比对结果显示鲤鱼Romo1氨基酸序列与其他物种的Romo1氨基酸序列同源性很高,在进化上高度保守。运用MEGA5.2软件构建各个物种Romo1蛋白系统进化树。如图9所示,鲤鱼Romo1与青鱂Romo1相似度最高,亲缘关系最近。通过进一步的氨基酸序列一致性比较,进一步验证了克隆到的鲤鱼活性氧调节基因 Romo1的进化地位。  利用Real-time PCR方法分析了Romo1 mRNA在正常鲤鱼肝、脾、鳃、头肾、前肠、后肠、皮肤、肌肉、脑、性腺、口腔上皮11种组织中的表达差异,结果分析得Romo1在鲤鱼的体内表达广泛。  本研究利用鱼类常见的致病菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)注射刺激鲤鱼后,用实时荧光定量PCR分析注射刺激后不同的鲤鱼免疫相关组织中的Romo1 mRNA在不同时间段的表达量变化状况,初步研究鲤鱼Romo1的免疫功能。结果显示,Romo1 mRNA水平在鲤鱼头肾、肝脏、前肠、后肠、鳃中显著上调。其中,免疫刺激后鲤鱼 Romo1的表达量在前肠中升高最明显,鳃次之,后肠、头肾、肝脏紧随其后,在脾和皮肤中Romo1的表达水平呈略下降趋势,变化不明显。以上研究表明Romo1在鲤鱼抵抗嗜水气单胞菌的固有免疫反应中发挥重要的作用。
其他文献
本报告主要研究并分析中国农产品电商园区的发展背景和现状,重点对典型样本的农产品电商园区的发展现状做了调查与分析,总结了目前这些园区发展中遇到的问题并提出对策建议,
王箭
大鼠束缚浸水应激(RWIS)模型是刺激较强的复合应激模型。该应激模型是将大鼠四肢固定,之后浸入冷水(水温21±1℃),使其在短时间内被激怒,从而被迫接受躯体和心理双重刺激的复合应激
摘要:英语单元复习课是巩固本单元所学知识、发展未知知识、提高学习技能的重要课型。它的作用,就是帮助学生重温已学的知识和技能,使记忆中的痕迹得到强化,并对已获得的知识加以整理、归纳、概括,使知识条理化、系统化。也是教师有意引导学生多动脑、多动手、多参加课堂活动,发展学生积极思维,创新学习方法的重要手段。那么,如何上好高中英语复习课呢?笔者经过近一个学期的实践,认为运用思维导图进行单元复习,是一个事半
日本血吸虫病(Schistosomiasis japonica)是我国一种危害严重的人畜共患寄生虫病。东方田鼠是迄今发现的唯一一种具有抗血吸虫病作用的哺乳动物。如能筛选、克隆出东方田鼠抗血
学位
束缚-浸水应激(RWIS)是一种复合应激模型,能够给大鼠造成生理和心理强度较大的有害刺激。在该应激模型中,可以在较短时间内激怒大鼠,使其体温降低以及胃肠机能发生紊乱,导致胃酸的
肥厚型心肌病(Hypertrophic Cardiomyopathy, HCM)是青少年及运动员心源性猝死的主要原因,发病率约为0.2%。肥厚型心肌病主要表现为常染色体显性遗传,而线粒体功能障碍也是导致H
摘要:在传统的初中音乐课堂教学中,教师音乐教学主要局限在声乐教学中,对于器乐的学习比较被动,同时由于音乐课程非主体课程,不被学校重视,导致学生尽管喜欢音乐课,但是课程教学却非常有效,往往会被其他课程所取代。因而,确定音乐课程的作用,保证音乐教学的效果一直是音乐教师重点研究的问题。本文主要研究“带动唱”在初中音乐教学中的作用,并阐述“带动唱”的教学方法在初中音乐课堂中的具体应用。  关键词:“带动唱
摘要:在中学英语教学中,要打好学生的英语基础,必须有大量的阅读输入。英语简易读物的利用被实践证明是行之有效的方法,不仅能提高学生的语言综合运用能力,还能拓宽知识面,培养人文素养。  关键词:英语学习;阅读;简易读物  中图分类号:G632.0 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)10-0019  英语教育者都明白“语言输入”与“语言输出”的关系:输入是输出的基础,没有输入就没有