谷胱甘肽S-转移酶Omega1对宫颈癌细胞侵袭迁移及增殖能力的影响

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shuang901014
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目的:分析谷胱甘肽S-转移酶Omega 1(Glutathione transferase Omega 1,GSTO1)在子宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞中的表达与患者临床病理特征和预后的关系;初步探究宫颈癌细胞GSTO1表达下调后对宫颈癌细胞侵袭迁移及增殖能力的影响。方法:1、免疫组化染色(Immunohistochemical staining,IHC)法检测GSTO1在102例宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞中的表达情况,并以33例正常宫颈组织作为对照。根据IHC评分结果分为高表达和低表达,用卡方检验分析GSTO1在宫颈癌组织和正常宫颈组织表达的差异。2、分析GSTO1在癌组织中表达情况,并分别按照患者年龄、宫颈癌类型、FIGO(2018)分期、癌细胞分化程度、肿瘤大小、间质浸润深度(Deep stromal invasion,DSI)、有无淋巴脉管间隙浸润(lymph-vascular space invasion,LVSI)、有无淋巴结转移(lymph node metastases,LNM)分组。用卡方检验分别对102宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞中GSTO1的表达水平与患者一般临床病理特征进行相关性分析。3、对102位宫颈癌患者进行随访(3月/次,截止到2022年4月),了解患者是否有复发或死亡情况以记录无进展生存时间(Progression-Free-Survival,PFS)及总生存时间(Overall Survival,OS)。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞中的GSTO1的表达水平与患者临床预后的相关性。4、用慢病毒转染法下调GSTO1在三种宫颈癌细胞系(He La、Si Ha和C33A)中的表达。用嘌呤霉素进行细胞筛选,构建GSTO1稳定下调的(sh GSTO1)宫颈癌细胞稳转株,同时以转染空载体慢病毒的细胞作为转染对照组(sh NC)。用q RT-PCR法及Western blot(WB)法验证GSTO1下调效果。5、收集宫颈癌sh GSTO1稳转株细胞为实验组,以宫颈癌原株细胞和sh NC稳转株作为对照组。通过Transwell细胞侵袭、迁移实验,细胞划痕实验及EDU细胞增殖实验检测三种宫颈癌细胞系中GSTO1下调后对其侵袭、迁移和增殖能力的影响。6、用GSTO1稳定下调的宫颈癌He La细胞(He La-sh GSTO1)为实验组,以He La-sh NC细胞和He La细胞为对照组,分别构建裸鼠皮下移植瘤模型。观察GSTO1蛋白下调对He La细胞形成的皮下移植瘤生长情况的影响。结果:1、GSTO1在宫颈癌组织癌肿瘤细胞中的高表达率(60.78%)高于正常宫颈组织上皮细胞(0.00%),两组比较差异显著(X~2=37.095,p=0.0001);2、GSTO1在FIGO(2018)分期为ⅠB2~ⅡA2期、癌细胞中低分化、肿瘤大小≥2.5cm、DSI≥1/2全层、有LVSI、有LNM的宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞中的高表达率分别高于ⅠA1~ⅠB1期(p=0.001)、高分化(p=0.017)、肿瘤大小<2.5cm(p=0.012)、DSI<1/2全层(p=0.001)、无LVSI(p=0.001)、无LNM(p=0.040)的患者;GSTO1的表达均与患者年龄(p=0.805)、肿瘤类型无关(p=0.337)。3、对宫颈癌患者连续随访,中位随访时间为44(9~125)月。Kaplan-Meier法分析随访结果显示,GSTO1在宫颈癌患者肿瘤细胞中的表达与患者5年PFS及OS均有相关性。GSTO1高表达患者预后较差(p<0.05);4、慢病毒感染法构建GSTO1稳定下调的宫颈癌细胞系。WB结果显示,He La、Si Ha、C33A细胞sh GSTO1组与sh NC组比较,GSTO1分别被下调为15.12%(t=25.37,p<0.0001)、27.36%(t=11.77,p=0.0003)和12.58%(t=18.73,p<0.0001);用q RT-PCR法进一步验证,结果与之相似。5、sh GSTO1组的宫颈癌细胞与sh NC和原株组相比,增殖、侵袭和迁移能力均明显降低(p均<0.05)。6、在裸鼠皮下异种移植瘤模型中,裸鼠皮下接种细胞28天后,He La-sh GSTO1组与sh NC组和He La原株组相比所形成的皮下瘤明显较小,差异有意义(F=22.411,p<0.01)。He La细胞GSTO1下调显著抑制了裸鼠皮下瘤的生长。结论:1、宫颈癌患者癌组织肿瘤细胞中GSTO1的表达与患者部分临床病理特征和预后相关;2、下调GSTO1的表达可以在体外降低宫颈癌细胞增殖能力,并抑制其侵袭迁移;3、宫颈癌细胞GSTO1下调可以在体内抑制裸鼠荷瘤的生长。
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