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目的:牙龈间充质干细胞是一类具有自我更新、多向分化、抗炎和免疫调节作用的干细胞。有研究显示其易于分离,形态单一,在长期培养中表现出稳定的表型,能够维持正常的核型和端粒酶活性,不具有致瘤性,且免疫原性低。据报道其具有成骨分化的能力,在骨组织重建和再生方面具有潜在的价值。本实验通过将人牙龈间充质干细胞(Gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)局部注射到构建的大鼠实验性牙周炎模型中,观察其对实验性牙周炎的治疗效果。方法:1. 将40只SD雄性大鼠随机分为四组:1)正常组(N组);2)生理盐水组(Na Cl组);3)牙周炎组(P组);4)细胞注射组(C组)。使用0.2mm正畸结扎丝在Na Cl组、P组、C组所有大鼠的双侧上颌第二磨牙牙颈部进行结扎,配合蘸葡萄糖水饮食诱导实验性牙周炎模型建立,N组不做任何处理。2. 第8周结束后从Na Cl组、P组、C组每组中随机各抽取一只大鼠,将其处死,留取双侧上颌骨标本,经大体检查以及病理切片结果验证牙周炎模型是否建立成功。然后小心缓慢地取下三组中其它大鼠牙颈部的正畸结扎丝,C组大鼠双侧上颌第二磨牙颊腭侧近中、中央及远中龈沟内各注射15ul人GMSCs悬浮液(细胞密度为10~6/100ml,注射使用的人GMSCs+Na Cl悬浮制剂由河北医科大学第一医院干细胞实验室提供),注射深度以针尖触及骨面稍遇到阻力即可。Na Cl组大鼠在相同部位注射等量的生理盐水,每两周注射一次,共注射两次,P组及N组不接受注射。3. 第四周结束后,腹腔麻醉下股动脉采血并处死大鼠,立即分离双侧上颌骨,4%多聚甲醛固定右侧上颌骨48h,脱钙4周后行HE染色分析,左侧上颌骨经机械分离软组织后测量釉牙骨质界(Cemento-enamel junction,CEJ)到牙槽嵴顶的距离所得的数据记为牙槽骨丧失值(Alveolar bone loss,ABL)。酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测大鼠血清中白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:1.结扎8周后处死大鼠,肉眼观察其大体标本,可见双侧上颌第二磨牙牙颈部结扎部位牙龈红肿,牙颈部周围牙石及菌斑堆积,病理切片结果显示结合上皮向根方增殖,牙周袋形成以及牙槽骨嵴顶吸收明显,证明牙周炎建模成功。2.与Na Cl组比较,C组ABL值明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),C组与N组ABL值之间差异无统计学意义(P﹥0.05)。3.C组血清中IL-1β及TNF-α的含量均明显低于Na Cl组(P<0.05),差异具有统计学意义。4.HE染色结果显示P组及Na Cl组牙龈乳头破坏,组织结构不完整,牙龈组织中出现大量炎症细胞,结合上皮向根方增殖明显,牙槽骨嵴顶高度降低明显。C组牙龈组织有少量炎症细胞浸润,结合上皮轻度向根方迁移,牙槽骨嵴顶轻度吸收,N组牙龈乳头结构保持完整,结合上皮附着在釉牙骨质界处,无明显牙槽骨嵴顶的吸收破坏,牙龈组织中未见明显炎症细胞的浸润。结论:1.正畸结扎丝结扎牙颈部联合葡萄糖水饮食成功构建大鼠牙周炎动物模型。2.局部注射的人GMSCs在大鼠体内具有抗炎作用,降低了血清中炎症因子IL-1β及TNF-α的表达,从而抑制骨吸收,对牙周炎产生一定的治疗作用。