乏氧诱导因子-2α与微小RNA-150在肝细胞癌中的表达及意义

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背景:近些年来癌症的死亡率逐年升高,原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球六大癌症之一,同时也是全球第三大常见癌症死亡原因,中国是肝癌发病率高的地区之一。据2014年统计结果表明,我国肝癌的发病数约36万人,死亡数约3.19万人,死亡率居所有恶性肿瘤的第二位,对人类的健康造成了极大的威胁。肝癌的诊断主要依靠影像学检查,但由于影像学检查的放射性,患者不能进行频繁的检查,降低了早期诊断的概率。肝活检也是一种准确的诊断方法,但其相关的缺点,包括侵袭性和患者依从性差,限制了它的广泛应用,相反,血清肿瘤标志物操作简单,受到患者和医生的青睐。筛查HCC高危患者的早期血清学标志物可能会降低癌症相关死亡率,降低医疗费用。但是临床上缺乏早期症状和早期诊断生物标志物,大部分患者从发现到确诊通常已经进展到晚期,并没有机会接受根治性治疗手段,即使行手术、化疗等治疗措施仍具有较高的复发和死亡率。乏氧微环境是多数肿瘤的共同特征,癌细胞对于长时间乏氧的耐受机制可能导致基因的转录或翻译水平出现异常,乏氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)作为细胞乏氧感知和适应的主要转录激活因子,在DNA和表观遗传水平上调控众多基因的表达,它的作用可导致线粒体氧化代谢、葡萄糖摄取和氧化、能量生产和血管生成的改变,从而导致癌细胞得以增殖、迁移和存活。因此,HIF对于肿瘤发生发展过程有着重要作用。在肿瘤发生发展过程中,微小RNA既可作为癌基因,也可作为抑癌基因来调节肿瘤细胞的增殖、凋亡和分化,起到促进或抑制肿瘤发生发展的作用,且越来越多的证据显示异常表达的microRNA与肿瘤发生发展有着密切的关系。因此对HIF和mRNA的探究,有助于帮助我们寻找一个有效的标志物来实现肝癌的早期发现和改善患者的预后。目的:探讨乏氧诱导因子-2α与微小RNA-150在肝细胞癌中的表达及意义,研究肝癌与癌旁组织中表达差异基因,并探究临床患者的病理组织与血液中差异基因的表达量。方法:1.生信分析通过TCGA数据库下载肝癌基因表达数据,通过perl命令进行ID转换,通过OSluca进行生存分析,然后进行GSEA功能富集分析2.实验验证1)收集临床患者肝癌组织以及癌旁组织,收集肝癌患者血液以及健康志愿者血液;2)将肝癌组织以及癌旁组织行HIF-2α免疫组化检测,并进行分析;3)ELISA检测血清中HIF-2α的表达量,并进行分析;4)将肝癌组织及癌旁组织提RNA,行qPCR检测,检测hsa-miR-150-5p的表达量;5)将肝癌患者及健康志愿者血液提RNA,行qPCR检测,检测hsa-miR-150-5p的表达量;结果:1.生信分析发现肝癌组织及癌旁组织中,HIF-2α和hsa-miR-150-5p表达差异较为显著,P<0.05;且具有相关性,生存分析发现HIF-2α及hsa-miR-150-5p共高表达组预后要好于其他组。2.免疫组化结果显示,肝癌组织样本阳性细胞密度显著低于癌旁组织的阳性细胞密度,肝癌组织样本的平均光密度也显著低于癌旁样本。说明肝癌组织HIF-2α阳性率低于癌旁组织。.3.ELISA检测结果显示,肝癌患者血液中HIF-2α浓度显著低于健康志愿者血液,P<0.05。4.经实时荧光定量PCR检测,结果显示肝癌组织中hsa-miR-150-5p表达量显著低于癌旁组织,P<0.05;肝癌患者血液中hsa-miR-150-5p表达量要显著低于健康患者血液。结论:肝癌的发生及进展与HIF-2α及hsa-miR-150-5p具有一定的联系,肝癌患者中HIF-2α及hsa-miR-150-5p高表达也提示着良好的预后,HIF-2α与hsa-miR-150-5p可以作为良好的判断肝癌预后情况的潜在指示物。HIF-2α及hsa-miR-150-5p在肝癌中的作用机制还未探究,需要更进一步的研究。
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