【摘 要】
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目的:1.研究电针“足三里”和“肺俞”穴对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺神经内分泌细胞（PNECs）的激活及其分泌的神经活性物质降钙素基因相关肽（CGRP）、五羟色胺（5-HT）的影响。2.研究电针的抗炎效应是否通过α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）抑制PNECs增殖和分泌发挥作用,探讨针刺治疗COPD的可能作用机制。方法:1.动物分组及处理:将雄性SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（No.81373743）； 安徽省自然科学基金面上项目（No.2008085MH267）； 安徽中医药大学自然科学研究项目（2020zrzd03;2019zryb01）；
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目的:1.研究电针“足三里”和“肺俞”穴对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺神经内分泌细胞（PNECs）的激活及其分泌的神经活性物质降钙素基因相关肽（CGRP）、五羟色胺（5-HT）的影响。2.研究电针的抗炎效应是否通过α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）抑制PNECs增殖和分泌发挥作用,探讨针刺治疗COPD的可能作用机制。方法:1.动物分组及处理:将雄性SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、模型+电针组、模型+α-BGT+电针组,每组7只。正常组不做任何处理;模型组大鼠采用香烟烟熏12周方法复制COPD大鼠模型;模型+电针组大鼠予双侧“足三里”和“肺俞”穴施以电针针刺,每次30 min,每日1次,连续14天;模型+α-BGT+电针组大鼠则在电针前30 min行腹腔注射α7nAChR阻断剂α-银环蛇毒素（α-BGT,1μg/kg）,持续14天。2.造模方法及评价:香烟烟熏12周方法复制COPD大鼠模型,每天上下午各烟熏一次,每次1 h;COPD大鼠模型复制成功的标准:肺功能下降明显,肺组织病理形态显示肺内炎症反应明显,大量炎性细胞浸润。3.电针治疗:选取大鼠双侧“足三里”穴（ST 36）和“肺俞”穴（BL 13）。电针频率4/20 Hz,强度1-3 m A,以能引起大鼠穴位处皮肤轻微颤动为宜。每日电针治疗30 min,每日1次,持续14天。4.指标检测:检测大鼠肺功能,HE染色法观察肺组织病理形态,Grimelius银染法观察肺组织PNECs阳性表达及分布,免疫组织化学法观察肺组织中CGRP、5-HT、α7nAChR的阳性表达,分析其积分光密度（IOD）。ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织中CGRP、5-HT、乙酰胆碱（ACh）及肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、转录生长因子（TGF）-β1的含量,并分析CGRP、5-HT分别与TNF-α、IL-1β的相关性;实时荧光定量PCR和Western-blot法分别检测肺组织中支配PNECs的神经纤维标记物CGRP、三磷酸腺苷受体P2X配体门控离子通道3（P2X3）和α7nAChR的mRNA和蛋白表达。结果:1.香烟烟熏12周结束后,与正常组比较,模型组大鼠用力肺活量（FVC）、第0.1秒用力呼气量（FEV0.1）下降（P＜0.05）,第0.3秒用力呼气量（FEV0.3）、FEV0.1占FVC比值（FEV0.1/FVC）、FEV0.3占FVC比值（FEV0.3/FVC）均显著下降（P＜0.01）,大鼠肺功能明显下降。肺组织病理可见小支气管管壁及肺泡间隔增厚,炎细胞浸润。肺组织中小气道上皮银染阳性的PNECs的IOD显著升高（P＜0.01）。肺组织中CGRP、5-HT、α7nAChR阳性表达增加,其IOD值显著升高（P＜0.01）。BALF和肺组织中CGRP、5-HT、ACh、TNF-α、IL-1β、TGF-β1含量均呈不同程度的升高（P＜0.05,P＜0.01）。肺组织中α7nAChR和神经纤维标记物CGRP、P2X3mRNA和蛋白表达显著增加（P＜0.01）。2.模型+电针组大鼠经电针治疗14天后,与模型组比较,其FVC、FEV0.1、FEV0.1/FVC、FEV0.3/FVC均呈不同程度升高（P＜0.05,P＜0.01）。肺组织上述病理变化均有改善。PNECs的IOD显著下降（P＜0.01）。CGRP、5-HT、α7nAChR阳性表达降低,其IOD值显著下降（P＜0.01）。BALF和肺组织中CGRP、5-HT、ACh、TNF-α、IL-1β、TGF-β1的含量均呈不同程度的下降（P＜0.05,P＜0.01）。α7nAChR和CGRP、P2X3 mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.01）。3.模型+α-BGT+电针组大鼠与模型+电针组比较,上述各项指标均呈不同程度逆转（P＜0.01,P＜0.05）。4.相关性分析结果表明,CGRP、5-HT和TNF-α、IL-1β均分别呈两两正相关（P＜0.01）。结论:1.香烟烟熏12周方法可以成功复制COPD大鼠模型,本实验制备的COPD大鼠模型与临床COPD患者的肺功能下降、肺部炎症反应的特点相吻合。2.电针能有效改善COPD大鼠肺功能和炎症反应,表明电针具有良好的治疗作用。3.电针抑制炎症反应,改善COPD肺功能,可能与其通过α7nAChR介导抑制PNECs活性,并下调CGRP、5-HT的表达有关。
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