HPLC测定白芍水提液中芍药苷的含量

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  白芍(Radix Paeoniae Alba)为毛茛科植物芍药(Paeonia lactif lora Pall)经水煮去皮后晒干使用的根,具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗等作用。用于头痛眩晕,肋痛,腹痛,四肢挛痛,血虚萎黄,月经不调,自汗,盗汗[1]。研究表明白芍中的芍药苷具有多种生物活性,对免疫、心血管、中枢神经以及平滑肌等方面均有肯定的药理作用,对肿瘤有抑制作用,还可保护心脑、肝脏、肾脏[2-4]。此外芍药苷还具有较高的临床应用价值,目前已有研究表明芍药苷对风湿性关节炎有确切的疗效[5],并且对系统性红斑狼疮也有一定作用。本文利用高效液相色谱法测定白芍水提液中芍药苷的含量,可为白芍的质量控制提供依据。
  1仪器和材料
  1.1仪器:高效液相色谱站(美国安捷伦1100);HS3120超声仪;微量分析天平(TG-322A上海天平仪器厂);分析天平(TG-328A,上海天平仪器厂);CS66-2电热恒温干燥箱(长沙医疗器械厂)。
  1.2材料:白芍经去离子水漂洗(洗去浮尘与污物),于干燥箱中60℃干燥,粉碎,置干燥器中备用。
  1.3试剂:芍药苷标准品(购自中国药品生物制品鉴定所,批号为:110736-200424),色谱纯甲醇。
  2试验方法
  2.1储备液的制备 精密称定干燥至恒重的芍药苷对照品,用水溶解配成浓度为2.87mg·mL-1芍药苷储备液。
  2.2测定方法YWG—C18柱(4.6mm×250mm,10μm),流动相:甲醇:水=15:85,测定波长: 218 nm, 柱温为25℃,流速为1.0mL/min,进样量为20μL。
  2.3标准曲线的制备 用上述配置好的芍药苷储备液配成系列浓度为1.435mg·mL-1,0.7175mg·mL-1,0.3588mg·mL-1,0.1794mg·mL-1,0.0897mg·mL-1的标准液。按“2.2测定方法”测定,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标做标准曲线。
  2.4供试溶液制备 取药材粉末5份,精密称定,分别加入20mL蒸馏水,浸泡30min沸水浴30min。静置分离,吸取上清液,在余液中加入15mL水,沸水浴15min,静置取上清液,再次在余液中各加入5mL水,沸水浴15min,静置提取上清液。合并三次提取液,定容至50.00mL,取提取液经12000r/min超速离心10min,取离心后上清液经0.45μm微孔滤膜过滤备用。
  3方法学考察
  3.1精密度试验 取芍药苷对照品按“2.2测定方法”项下进行测定,并记录峰面积A,重复测定5次,计算其RSD。
  3.2稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于不同时间测定,计算其RSD,考察供试品稳定性。
  3.3重复性试验 取同一批药材5份按上述方法提取并测定芍药苷含量。
  3.4回收率试验 精密称取已测知芍药苷含量的白芍样品,分别加入高、中、低不同质量的芍药苷对照品, 按测定方法测定芍药苷总含量,每种浓度测定三份,计算回收率。
  4结果
  4.1标准曲线 由芍药苷标准系列浓度及峰面积值,可得其标准曲线,回归方程为A=3174C+11.97(C:mg·mL-1),相关系数为r=0.9998,表明相关性很好。
  4.2精密度试验 所测数据表明精密度良好,RSD为1.6%,。
  4.3稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于不同时间测定,结果显示该供试液稳定性良好,RSD为1.7%。
  4.4重复性试验 该方法的重复性试验RSD值为6.8%。
  4.5回收率试验 此操作方法芍药苷平均回收率为98.53%,RSD为3.1%,方法不存在系统误差,符合实验要求。
  4.6含量测定分析 本方法测得的该批白芍水提液中得芍药苷平均含量为2.58%,RSD为6.8%。
  5讨论
  白芍是传统中药,在我国主产于浙江(杭白芍)、安徽(亳白芍)、四川(川白芍),另外河南、山东、陕西、贵州、湖南、等地亦有栽培[6]。该研究采用了与药典上不同的色谱条件,在流动相的选择上本研究选择了甲醇和水,相对药典上的乙腈和磷酸溶液来说有价格便宜、对色谱柱无损害等优点。
  参考文献
  [1]中国药典(一部)[S].北京化学工业出版社.2005:68-69.
  [2]胡南,许惠玉,陈志伟,等.芍药苷的药理药理学研究进展[J].齐齐哈尔医学院学报,2007,28(9):1093-1095.
  [3]蒋户俊,王巧,李小娜等.白芍总苷的药理作用和质量控制方法研究进展[J].河北医科大学学报,2006,27(5):500-502.
  [4]周强,栗占国.白芍总苷的药理作用及其在自身免疫性疾病中的应用[J].中国新药与临床杂志,2003,22(11):687-689.
  [5]尹耕,谢其冰.白芍总甙治疗类风湿关节炎60例临床分析[J].现代预防医学,2007,34(19):3791-3794.
  [6]郑汉臣,蔡少青.药用植物学与生药学[M].北京:人们卫生出版社,2005,259-261.
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