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【中图分类号】R282.7【文献标识码】A【文章编号】1632-5281（2015）10
【摘要】目的：分析黄连中药材及其制剂的有效成分。方法：选择黄连中药材与双黄连胶囊，分别采用高效液相色谱（HPLC）法检测其有效成分，总结其临床检验结果并分析HPLC法检验的临床价值。结果：黄连中小檗碱含量为0.0564mg/g，线性范围为0.118～1.416μg，精密度RSD为1.7%，回收率为99.4%；双黄连胶囊中黄芩苷、绿原酸与连翘苷的含量为142mg/g、1.9mg/g及3.0mg/g，其线性范围分别为0.1～500mg/L、0.05～50mg/L、0.01～25mg/L，精密度RSD为2.1%、1.8%、1.6%，回收率为100.2%、98.3%及100.3%。结论：小檗碱及黄芩苷、绿原酸与连翘苷分别为黄连及双黄连胶囊的有效成分，采用HPLC检测的准确性、快捷性与重复性良好。
【关键词】黄连；制剂；有效成分
黄连主要是指云南黄连、三角叶黄连与毛茛科植物黄连的干燥根茎[1]，其味苦、性寒，可发挥清热燥湿、泻火解读等药用功效。近年来，大量现代药理实验通过提取黄连及其制剂的有效成分[2]，在强化传统药用价值的基础上也不断探索出新的药理作用。本研究采用HPLC法分别检测黄连与双黄连胶囊中的有效成分，并分析其有效成分含量测定的合理方法，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
选择中药材市场所购买的贡山县产3年生毛茛科植物云黄连，河南天方药业提供的双黄连胶囊各3个批次。应用Waters 600型高效液相色谱仪，雷磁pH计，上海卢湘仪离心机仪器有限公司生产的电子天平与离心机，上海宁商超声仪有限公司生产的超声仪。实验试剂包括甲醇、乙醇、甲酸与乙腈，盐酸小檗碱、连翘苷、黄芩苷与绿原酸等对照品均为中药药品生物制品检验所提供。
1.2 检验方法
1.2.1 供试液制备
①黄连：提取0.2g黄连粉末放置锥形瓶内，将1：100盐酸-甲醇混合液50mL计入后密封称重，经超声提取后放置在称重，补充甲醇缺失重量，均匀滤过后获得续滤液2mL，再加入甲醇10mL经滤膜滤过。②双黄连胶囊：提取0.2g双黄连胶囊粉末，加入0.1%甲醇甲酸溶液密封称重，超声提取后加入含0.2%甲醇的乙腈溶液，均匀滤过后获得续滤液。
1.2.2 色谱条件
色谱柱：Waters BEH-C18柱（1.7μm，2.1mm×100mm）；流动相：乙腈，0.2%甲酸溶液，0.1%甲酸甲醇溶液；流速0.2mL/min；柱温35℃；波长346nm；进样量5μL。
2 结果
2.1 黄连有效成分提取结果
提取1、2、4、8、10、12μL对照液，根据峰面积计算回归方程Y=60932X+49387，r=0.9991，依据结果分析进样量在0.118～1.416μg范围线性良好。获取药液10μL，依次在0、2、4、8、12h进样，其峰面积RSD为1.5%，12h内均较为稳定。对照液8μL反复进样6次，计算其精密度峰面积RSD为1.7%。将6份黄连粉末反复进行测定，其小檗碱含量RSD为1.2%，具有良好重复性。重复加入对照液1.5、3.0、4.5mL，再进样药液10μL，计算其平均回收率为99.4%。计算黄连中验算小檗碱平均含量为0.0564mg/g，其HPLC图详见图1。
2.2 双黄连胶囊有效成分提取结果
依次配置0.01、0.05、0.50、5.00、10.00、20.00、30.00与50.00mg/L的黄芩苷溶液、绿原酸溶液与连翘苷溶液，评估其线性关系回归方程分别为黄芩苷：Y=39309X+39102，r=0.9991；绿原酸：Y=236785X+19102，r=0.9918；连翘苷：Y=192763X+22008，r=0.9986，提示黄芩苷线性范围为0.1～500mg/L，绿原酸为0.05～50mg/L，连翘苷为0.01～25mg/L。将6分同批次药液进行重复测量，评估黄芩苷、绿原酸与连翘苷的标准偏差RSD为2.1%、1.8%及1.6%。根据加标法实施回收率计算，将9份提取液分为3组，加入对照溶液后计算黄芩苷、绿原酸与连翘苷的回收率为100.2%、98.3%及100.3%。最终确定黄芩苷、绿原酸与连翘苷的含量为142mg/g、1.9mg/g及3.0mg/g，其HPLC图详见表2。
3 小结
黄连主要为毛茛科、黄连属草本植物，具有泻火解毒、清热燥湿等功效，神农本草经中指出黄连主治热气，目痛，眦伤，泣出，明目，肠澼，腹痛，下痢，妇人阴中肿痛[3]。现代药理研究认为黄连中小檗碱、黄连碱与甲基黄连碱等成分是其发挥功效的主要有效成分[4]，本研究通过对黄连与双黄连胶囊进行有效成分提取实验，证实盐酸小檗碱是黄连中药的主要有效成分，而黄芩苷、绿原酸与连翘苷是双黄连胶囊的主要有效成分。同时，研究进一步证实采用HPLC法测定黄连及其制剂的有效成分具有快速、灵敏、便捷等优点，适宜临床推广应用。
参考文献：
[1]刘柏东，吴晓霞，于友华.黄连解毒汤主要有效成分对人CYP450酶的体外抑制作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（12）：115-118.
[2]朱继军，张华.不同生长期黄连有效成分含量研究[J].山东中医杂志，2014，19（7）：586-587.
[3]杜巧辉，谢晓芳，彭成，等.黄连解毒汤不同组分群对热度血瘀证大鼠的影响[J].中药与临床，2014，5（4）：9-11.
[4]石瑶，王文辉，杨俊，等.HPLC测定道地产区云黄连有效成分含量[J].云南大学学报（自然科学版），2009，31（S1）：446-448.
【摘要】目的：分析黄连中药材及其制剂的有效成分。方法：选择黄连中药材与双黄连胶囊，分别采用高效液相色谱（HPLC）法检测其有效成分，总结其临床检验结果并分析HPLC法检验的临床价值。结果：黄连中小檗碱含量为0.0564mg/g，线性范围为0.118～1.416μg，精密度RSD为1.7%，回收率为99.4%；双黄连胶囊中黄芩苷、绿原酸与连翘苷的含量为142mg/g、1.9mg/g及3.0mg/g，其线性范围分别为0.1～500mg/L、0.05～50mg/L、0.01～25mg/L，精密度RSD为2.1%、1.8%、1.6%，回收率为100.2%、98.3%及100.3%。结论：小檗碱及黄芩苷、绿原酸与连翘苷分别为黄连及双黄连胶囊的有效成分，采用HPLC检测的准确性、快捷性与重复性良好。
【关键词】黄连；制剂；有效成分
黄连主要是指云南黄连、三角叶黄连与毛茛科植物黄连的干燥根茎[1]，其味苦、性寒，可发挥清热燥湿、泻火解读等药用功效。近年来，大量现代药理实验通过提取黄连及其制剂的有效成分[2]，在强化传统药用价值的基础上也不断探索出新的药理作用。本研究采用HPLC法分别检测黄连与双黄连胶囊中的有效成分，并分析其有效成分含量测定的合理方法，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
选择中药材市场所购买的贡山县产3年生毛茛科植物云黄连，河南天方药业提供的双黄连胶囊各3个批次。应用Waters 600型高效液相色谱仪，雷磁pH计，上海卢湘仪离心机仪器有限公司生产的电子天平与离心机，上海宁商超声仪有限公司生产的超声仪。实验试剂包括甲醇、乙醇、甲酸与乙腈，盐酸小檗碱、连翘苷、黄芩苷与绿原酸等对照品均为中药药品生物制品检验所提供。
1.2 检验方法
1.2.1 供试液制备
①黄连：提取0.2g黄连粉末放置锥形瓶内，将1：100盐酸-甲醇混合液50mL计入后密封称重，经超声提取后放置在称重，补充甲醇缺失重量，均匀滤过后获得续滤液2mL，再加入甲醇10mL经滤膜滤过。②双黄连胶囊：提取0.2g双黄连胶囊粉末，加入0.1%甲醇甲酸溶液密封称重，超声提取后加入含0.2%甲醇的乙腈溶液，均匀滤过后获得续滤液。
1.2.2 色谱条件
色谱柱：Waters BEH-C18柱（1.7μm，2.1mm×100mm）；流动相：乙腈，0.2%甲酸溶液，0.1%甲酸甲醇溶液；流速0.2mL/min；柱温35℃；波长346nm；进样量5μL。
2 结果
2.1 黄连有效成分提取结果
提取1、2、4、8、10、12μL对照液，根据峰面积计算回归方程Y=60932X+49387，r=0.9991，依据结果分析进样量在0.118～1.416μg范围线性良好。获取药液10μL，依次在0、2、4、8、12h进样，其峰面积RSD为1.5%，12h内均较为稳定。对照液8μL反复进样6次，计算其精密度峰面积RSD为1.7%。将6份黄连粉末反复进行测定，其小檗碱含量RSD为1.2%，具有良好重复性。重复加入对照液1.5、3.0、4.5mL，再进样药液10μL，计算其平均回收率为99.4%。计算黄连中验算小檗碱平均含量为0.0564mg/g，其HPLC图详见图1。
2.2 双黄连胶囊有效成分提取结果
依次配置0.01、0.05、0.50、5.00、10.00、20.00、30.00与50.00mg/L的黄芩苷溶液、绿原酸溶液与连翘苷溶液，评估其线性关系回归方程分别为黄芩苷：Y=39309X+39102，r=0.9991；绿原酸：Y=236785X+19102，r=0.9918；连翘苷：Y=192763X+22008，r=0.9986，提示黄芩苷线性范围为0.1～500mg/L，绿原酸为0.05～50mg/L，连翘苷为0.01～25mg/L。将6分同批次药液进行重复测量，评估黄芩苷、绿原酸与连翘苷的标准偏差RSD为2.1%、1.8%及1.6%。根据加标法实施回收率计算，将9份提取液分为3组，加入对照溶液后计算黄芩苷、绿原酸与连翘苷的回收率为100.2%、98.3%及100.3%。最终确定黄芩苷、绿原酸与连翘苷的含量为142mg/g、1.9mg/g及3.0mg/g，其HPLC图详见表2。
3 小结
黄连主要为毛茛科、黄连属草本植物，具有泻火解毒、清热燥湿等功效，神农本草经中指出黄连主治热气，目痛，眦伤，泣出，明目，肠澼，腹痛，下痢，妇人阴中肿痛[3]。现代药理研究认为黄连中小檗碱、黄连碱与甲基黄连碱等成分是其发挥功效的主要有效成分[4]，本研究通过对黄连与双黄连胶囊进行有效成分提取实验，证实盐酸小檗碱是黄连中药的主要有效成分，而黄芩苷、绿原酸与连翘苷是双黄连胶囊的主要有效成分。同时，研究进一步证实采用HPLC法测定黄连及其制剂的有效成分具有快速、灵敏、便捷等优点，适宜临床推广应用。
参考文献：
[1]刘柏东，吴晓霞，于友华.黄连解毒汤主要有效成分对人CYP450酶的体外抑制作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（12）：115-118.
[2]朱继军，张华.不同生长期黄连有效成分含量研究[J].山东中医杂志，2014，19（7）：586-587.
[3]杜巧辉，谢晓芳，彭成，等.黄连解毒汤不同组分群对热度血瘀证大鼠的影响[J].中药与临床，2014，5（4）：9-11.
[4]石瑶，王文辉，杨俊，等.HPLC测定道地产区云黄连有效成分含量[J].云南大学学报（自然科学版），2009，31（S1）：446-448.