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摘要：目的 通过不同炮制时段来研究何首乌中蒽醌的含量变化情况。方法 何首乌分别采用黑豆汁拌蒸不同时段， 醋酸镁比色法分别测定炮制饮片中游离蒽醌和总蒽醌的含量。结果 用黑豆汁拌蒸的何首乌饮片10h内游离蒽醌含量逐渐升高， 总蒽醌含量没有显著性变化。结论 何首乌饮片的炮制时间对其药性成分有影响，应统一规范其炮制时间。
关键词： 何首乌； 高效液相色谱法； 醋酸镁比色法
中图分类号：R94 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）8-122-02
何首乌为蓼科植物何首乌（P olygonum multif lorum Thunb）。 的干燥块根， 为常用中药。生品具有解毒、消痈、润肠通便之功效。制首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、增强免疫力、改善记忆障碍及抗衰老等功效[1]。何首乌中主要有效成分为蒽醌类和二苯乙烯化合物。结合蒽醌具有泻下作用， 何首乌经炮制后结合蒽醌逐渐转为无泻下作用的游离蒽醌[2] 。现有的炮制方法有多种， 但各种方法均未规范其炮制时间。炮制时间的长短对其各个成分的含量影响较大，探明其在炮制前后主要成分变化是很有必要的。本实验选择5中国药典6中规定的黑豆汁拌蒸法， 考察不同时间的黑豆汁拌蒸工艺对何首乌中蒽醌主要化学成分的影响。
1 器材
日本岛津高效液相色谱仪， SPD-10VAP 型紫外检测器；FA2004电子天平；UV-2201型紫外- 可见分光光度计（日本Sh-im adzu）， AS3120型超声波清洗器（奥特赛思仪器有限公司）。何首乌药材由吉林敖东药业集团股份有限公司提供， 经鉴定均为蓼科植物何首乌的干燥块根。实验样品为实验室自制的何首乌生饮片， 经黑豆汁拌蒸0， 2， 4， 6， 8， 10 h的饮片。黑豆汁拌蒸法： 取黑豆适量（ 1 /10何首乌的量）， 加适量的水煎煮2次，用200目筛绢滤出， 合并滤液， 浓缩至约黑豆的2.5 倍。将黑豆汁加入何首乌饮片中，拌匀，浸润24 h，取出浸润后的何首乌适量作为0 h饮片单放， 其余的按2，4，6，8，10 h进行蒸制。乙腈为色谱纯（美国F isher公司）； 水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取经105e干燥至恒重的1，8- 二羟基蒽醌对照品5.1mg， 置25ml容量瓶中， 甲醇溶解并定容， 作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
取各何首乌饮片粉末（ 过80目筛）0. 5 g， 精密称定， 置50 m l容量瓶中， 加入氯仿40ml 超声处理40min， 放冷， 用氯仿稀释至刻度， 摇匀， 过滤， 取续滤液作为供试品溶液[1]。另取各何首乌饮片粉末（过80目筛）0.5g， 精密称定，置150ml锥形瓶中， 加30ml氯仿和30ml硫酸（ 2.5 mol# L- 1 ），水浴回流水解2 h， 放冷， 水解液置分液漏斗中， 分取氯仿层于50ml容量瓶中， 水层用氯仿洗涤（5m l@3）， 洗液并入容量瓶中， 并用氯仿稀释至刻度， 摇匀， 过滤， 取续滤液作为供试品溶液[2] 。
2.3 线性关系考察
精密吸取/2.1.10 项下的对照品溶液0.2， 0.4， 0.6， 0.8，1.0 ml置l0ml容量瓶中，置水浴上蒸干， 放冷，将残渣用0.035 mol#L-1醋酸镁-甲醇溶液溶解并定容， 以0.035 mol#L- 1醋酸镁-甲醇溶液为空白，在510nm测定吸光度，以吸光度（ Y）为纵坐标，浓度（ X，Lg# ml-1）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为；Y= 0.049 9X+0.0036（ r= 0.9999 ），表明1， 8- 二羟基蒽醌在4.08～ 20. 40 Lg 范围内线性关系良好。
2.4 精密度实验
精密吸取/ 2. 1. 10项下的对照品溶液0.5ml 按醋酸镁比色法测定5次， 测得吸光度的RSD为0.34%。
2.5 回收率实验
精密称取已知含量的样品5份， 每份0.5g， 置50ml容量瓶中， 加入1ml对照品溶液， 再加入氯仿40ml超声处理40m in。放冷， 氯仿定容，摇匀，过滤。精密吸取续滤液8 ml置l0ml容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣。按醋酸镁比色法测定， 计算1， 8一二羟基蒽醌的回收率。结果其平均回收率为98.06% + 1.98%（n=5）。
2.6 测定方法与结果
精密吸取/ 2. 1. 20项下的供试品溶液[ 1] 8ml置10ml容量瓶中， 水浴蒸干， 放冷， 得残渣。按醋酸镁比色法在510nm 测定吸光度， 计算游离蒽醌的含量， 结果见表1。精密吸取/ 2. 1. 20项下的供试品溶液[ 2] 4 m l置10ml容量瓶中， 蒸干， 放冷， 得残渣。按醋酸镁比色法在510nm 测定吸光度，计算样品中总蒽醌的含量。由此， 总蒽醌含量减去游离蒽醌含量， 即得结合蒽醌含量。结果见表1。
3 讨论
关于炮制后何首乌中有效成分含量变化已有报道[4]，但均是以制后结合蒽醌几乎转变成游离蒽醌为炮制目的， 所以选定的炮制时间长（一般大于12 h）， 且时间间隔也很大。本文首次已2 h为间隔时间探讨了黑豆汁拌蒸10 h之内的有效成分含量的变化。本实验结果显示，用黑豆汁拌蒸不同时间蒽醌含量有差异，蒸制2～ 10 h，游离蒽醌的含量随炮制时间的延长逐渐升高，但总蒽醌含量只略有下降，无显著性差异，说明结合蒽醌在炮制过程中逐渐转变为游离蒽醌。经多次（ n = 6）实验测得黑豆汁拌蒸10h时已有46.5%的结合蒽醌转变为游离蒽醌。实验中发现蒸制时间的长短与其颜色也有着重要的关系，蒸制时间短，颜色暗淡无光泽；蒸制时间越长，其颜色逐渐乌黑发亮。实验中也意外地发现，黑豆汁浸润24 h的何首乌（即0 h 样品）中游离蒽醌的含量特别高，其原因有待进一步研究。
参考文献：
[1] 郑虎占. 中药现代研究与应用， 第3 卷[M ] . 北京： 学苑出版社， 1998.
[2] 王孝涛， 曹 晖， 刘玉萍. 中药采制与炮制技术[M ] . 北京： 华夏出版社， 2000： 23.
[3] 国家药典委员会. 中国药典， ? 部[ S ] . 北京： 化学工业出版社，2005： 123.
[4] 刘振丽， 宋志前， 张 玲. 不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响[ J] . 中国中药杂志， 2005， 30（ 5 ） ： 336.
关键词： 何首乌； 高效液相色谱法； 醋酸镁比色法
中图分类号：R94 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）8-122-02
何首乌为蓼科植物何首乌（P olygonum multif lorum Thunb）。 的干燥块根， 为常用中药。生品具有解毒、消痈、润肠通便之功效。制首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、增强免疫力、改善记忆障碍及抗衰老等功效[1]。何首乌中主要有效成分为蒽醌类和二苯乙烯化合物。结合蒽醌具有泻下作用， 何首乌经炮制后结合蒽醌逐渐转为无泻下作用的游离蒽醌[2] 。现有的炮制方法有多种， 但各种方法均未规范其炮制时间。炮制时间的长短对其各个成分的含量影响较大，探明其在炮制前后主要成分变化是很有必要的。本实验选择5中国药典6中规定的黑豆汁拌蒸法， 考察不同时间的黑豆汁拌蒸工艺对何首乌中蒽醌主要化学成分的影响。
1 器材
日本岛津高效液相色谱仪， SPD-10VAP 型紫外检测器；FA2004电子天平；UV-2201型紫外- 可见分光光度计（日本Sh-im adzu）， AS3120型超声波清洗器（奥特赛思仪器有限公司）。何首乌药材由吉林敖东药业集团股份有限公司提供， 经鉴定均为蓼科植物何首乌的干燥块根。实验样品为实验室自制的何首乌生饮片， 经黑豆汁拌蒸0， 2， 4， 6， 8， 10 h的饮片。黑豆汁拌蒸法： 取黑豆适量（ 1 /10何首乌的量）， 加适量的水煎煮2次，用200目筛绢滤出， 合并滤液， 浓缩至约黑豆的2.5 倍。将黑豆汁加入何首乌饮片中，拌匀，浸润24 h，取出浸润后的何首乌适量作为0 h饮片单放， 其余的按2，4，6，8，10 h进行蒸制。乙腈为色谱纯（美国F isher公司）； 水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取经105e干燥至恒重的1，8- 二羟基蒽醌对照品5.1mg， 置25ml容量瓶中， 甲醇溶解并定容， 作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
取各何首乌饮片粉末（ 过80目筛）0. 5 g， 精密称定， 置50 m l容量瓶中， 加入氯仿40ml 超声处理40min， 放冷， 用氯仿稀释至刻度， 摇匀， 过滤， 取续滤液作为供试品溶液[1]。另取各何首乌饮片粉末（过80目筛）0.5g， 精密称定，置150ml锥形瓶中， 加30ml氯仿和30ml硫酸（ 2.5 mol# L- 1 ），水浴回流水解2 h， 放冷， 水解液置分液漏斗中， 分取氯仿层于50ml容量瓶中， 水层用氯仿洗涤（5m l@3）， 洗液并入容量瓶中， 并用氯仿稀释至刻度， 摇匀， 过滤， 取续滤液作为供试品溶液[2] 。
2.3 线性关系考察
精密吸取/2.1.10 项下的对照品溶液0.2， 0.4， 0.6， 0.8，1.0 ml置l0ml容量瓶中，置水浴上蒸干， 放冷，将残渣用0.035 mol#L-1醋酸镁-甲醇溶液溶解并定容， 以0.035 mol#L- 1醋酸镁-甲醇溶液为空白，在510nm测定吸光度，以吸光度（ Y）为纵坐标，浓度（ X，Lg# ml-1）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为；Y= 0.049 9X+0.0036（ r= 0.9999 ），表明1， 8- 二羟基蒽醌在4.08～ 20. 40 Lg 范围内线性关系良好。
2.4 精密度实验
精密吸取/ 2. 1. 10项下的对照品溶液0.5ml 按醋酸镁比色法测定5次， 测得吸光度的RSD为0.34%。
2.5 回收率实验
精密称取已知含量的样品5份， 每份0.5g， 置50ml容量瓶中， 加入1ml对照品溶液， 再加入氯仿40ml超声处理40m in。放冷， 氯仿定容，摇匀，过滤。精密吸取续滤液8 ml置l0ml容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣。按醋酸镁比色法测定， 计算1， 8一二羟基蒽醌的回收率。结果其平均回收率为98.06% + 1.98%（n=5）。
2.6 测定方法与结果
精密吸取/ 2. 1. 20项下的供试品溶液[ 1] 8ml置10ml容量瓶中， 水浴蒸干， 放冷， 得残渣。按醋酸镁比色法在510nm 测定吸光度， 计算游离蒽醌的含量， 结果见表1。精密吸取/ 2. 1. 20项下的供试品溶液[ 2] 4 m l置10ml容量瓶中， 蒸干， 放冷， 得残渣。按醋酸镁比色法在510nm 测定吸光度，计算样品中总蒽醌的含量。由此， 总蒽醌含量减去游离蒽醌含量， 即得结合蒽醌含量。结果见表1。
3 讨论
关于炮制后何首乌中有效成分含量变化已有报道[4]，但均是以制后结合蒽醌几乎转变成游离蒽醌为炮制目的， 所以选定的炮制时间长（一般大于12 h）， 且时间间隔也很大。本文首次已2 h为间隔时间探讨了黑豆汁拌蒸10 h之内的有效成分含量的变化。本实验结果显示，用黑豆汁拌蒸不同时间蒽醌含量有差异，蒸制2～ 10 h，游离蒽醌的含量随炮制时间的延长逐渐升高，但总蒽醌含量只略有下降，无显著性差异，说明结合蒽醌在炮制过程中逐渐转变为游离蒽醌。经多次（ n = 6）实验测得黑豆汁拌蒸10h时已有46.5%的结合蒽醌转变为游离蒽醌。实验中发现蒸制时间的长短与其颜色也有着重要的关系，蒸制时间短，颜色暗淡无光泽；蒸制时间越长，其颜色逐渐乌黑发亮。实验中也意外地发现，黑豆汁浸润24 h的何首乌（即0 h 样品）中游离蒽醌的含量特别高，其原因有待进一步研究。
参考文献：
[1] 郑虎占. 中药现代研究与应用， 第3 卷[M ] . 北京： 学苑出版社， 1998.
[2] 王孝涛， 曹 晖， 刘玉萍. 中药采制与炮制技术[M ] . 北京： 华夏出版社， 2000： 23.
[3] 国家药典委员会. 中国药典， ? 部[ S ] . 北京： 化学工业出版社，2005： 123.
[4] 刘振丽， 宋志前， 张 玲. 不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响[ J] . 中国中药杂志， 2005， 30（ 5 ） ： 336.