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【摘要】
目的:建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片中有关物质。方法:对HPLC检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的色谱条件、最低检测限、精密度、稳定性、重现性进行研究。结果:有关物质测定中,精密度检查RSD为0.98%,重复性实验RSD为1.45%,有关物质的平均值为0.62%,有关物质在8小时内稳定。结论:该方法具有简便、准确、可靠、灵敏度高的优点,适用于盐酸伊伐布雷定片剂的质量控制。
【关键词】盐酸伊伐布雷定片;高效液相色谱法;有关物质
【中图分类号】R295 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0009-02
盐酸伊伐布雷定合成后有异构体存在,分别为R—异构体和S一盐异构体。R—异构体无药理活性,但通过在国内外较多研究资料表明R—异构体在制剂过程中并不发生转换,盐酸伊伐布雷定原料中控制了R-异构体含量,者制剂中不需检测。本文建立的HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片有关物质的方法,作为盐酸伊伐布雷定片的质量控制。现将其有关物质测定的研究资料总结如下。
1 仪器与试药
1.1仪器:日本岛津公司:LC-10ATvp输液泵、SPD—10Avp紫外检测器、ANASTAR色谱工作站。
1.2检测样品和试药: 盐酸伊伐布雷定片(江苏恒瑞医药股份有限公司提供测试样品:090301、090302、090303、090304、090305、090306),水为超纯水,色谱级乙腈(成都化学试剂厂生产),磷酸盐缓冲液为AR级。
2方法与结果
2.1色谱条件:
流动相:乙腈—pH7.6磷酸盐缓冲液(30:70—40:60)梯度洗脱(见表1),色谱柱:Kromasil C18柱(0.46cm×25cm,5μm),流速:1.0m/min,检测波长:220nm,柱温:25℃。
表1梯度洗脱表
时间(分钟)
乙腈(%)
pH7.6磷酸盐缓冲液(%)
0—20
30
70
20—30
30—40
40—50
40
40
30
60
60
70
50—60
30
70
2.2 制备供试品溶液:在同批号样品中取20片盐酸伊伐布雷定片,研细后,精密称定适量药粉,置10ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度(含量1mg/ml),摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3制备对照品溶液:精密吸取供试品溶液1mL,置100mI量瓶中,用流动相稀释制成1%的样品自身对照溶液。
2.4最低检测限:
分别称取盐酸伊伐布雷定适量,用流动相稀释成系列浓度的溶液,并精密吸取20?l,注入色谱仪中。结果表明:进样量为2.03ng时,峰高约变为基线噪音的3倍。故该条件下仪器对其成分的检测灵敏度高。
2.5精密度试验:
取品供试品溶液连续进样4次,每次20.0μl,将4次峰面积精密度计算,RSD=0.98%。
2.6稳定性实验:
取同一样品液分别在0h、1h、2h、4h、6h、8h进样检测,每次20μl,对所得的6次峰面积进行精密度计算,求得RSD为1.97%,表明样品盐酸伊伐布雷定片中有关物质在8h内稳定。
2.7重复性试验:
取同批号盐酸伊伐布雷定片20片,研细,按对角分样的原则分成6份,将每份样品按制备供试品溶液的方法制备样品液,进行有关物质测定,并根据线性关系计算有关物质量,样品中有关物质的平均質为0.62%,RSD为1.45%。
2.8 样品检测:
分别取6个批号盐酸伊伐布雷定片,按上述供试品溶液和对照品溶液的制备方法,制备样品液。分别量取样品也各20?l,进样检测。6批盐酸伊伐布雷定片的有关物质检测结果见表2
表2 6批盐酸伊伐布雷定片有关物质检测结果
批号
有关物质量(%)
批号
有关物质量(%)
090301
0.62
090304
0.62
090302
0.62
090305
0.63
090303
0.63
090306
0.62
3 讨论
盐酸伊伐布雷定片品是首例单纯减缓心率的有效药物,具有特殊降低心率的作用,不良反应小,其耐受性好,长期应用该药能有效改善改善心脏泵血的功能。盐酸伊伐布雷定片剂已在国外有销售,目前在国内尚未有厂家生产销售,是伊伐布雷定的盐酸盐[1],其化学名:3一(3一[[(7S)(3,4一二甲氧基苯并环丁烷[4.2.0]辛一1,3,5一三烯一7一基)甲基]一甲氨基]丙基)一1,3,4,5一四氢一7,8一二甲氧基一2—氢一3一苯并氮杂卓一2一酮盐酸盐。适用于不耐受或禁用β阻断剂和窦性心律正常的慢性稳定型心绞痛的患者[2],是第一个选择特异性作用于心脏起搏电流的抑制剂[3],具有特殊降低心率的作用,其耐受性好,不良反应小,长期应用伊伐布雷定片可有效改善心衰动物左心室的结构和功能、改善心脏泵血的功能。国内外有较多关于检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的研究,我们以上采用的HPLC法对其有关物质的检测,采用了流动相梯度洗脱的方法,节约了检测时间,并使各杂质峰都能很好地分离,使检测结果更为准确。
计算有关物质的方法:以自身溶液对照法计算杂质的含量。供试品溶液色谱图中若有杂质峰,其最大杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的一半,各杂质峰总面积不得大于对照液主峰面积的2倍。其测得有关物质的平均含量为0.62%,符合制剂中对有关物质的要求。
采用高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片的有关物质,该方法的重现性、精密度、分离度和稳定性等均符合相关要求,且灵敏度高,可用于盐酸伊伐布雷定片的有关物质控制。
参考文献
[1] 刘燕平,王德才.新型抗心绞痛药伊伐布雷定[J].中国新药杂志,2008,17(19):1718—1720.
[2] 高照,李法琦.伊伐布雷定减慢心率的研究现状[J].心血管病学进展,2009,30(6):995—998.
[3] 叶晓娟,吴勇,廖守主,等.伊伐布雷定的合成工艺改进[J].中国药物化学杂志,2010,20(2):106—109.
目的:建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片中有关物质。方法:对HPLC检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的色谱条件、最低检测限、精密度、稳定性、重现性进行研究。结果:有关物质测定中,精密度检查RSD为0.98%,重复性实验RSD为1.45%,有关物质的平均值为0.62%,有关物质在8小时内稳定。结论:该方法具有简便、准确、可靠、灵敏度高的优点,适用于盐酸伊伐布雷定片剂的质量控制。
【关键词】盐酸伊伐布雷定片;高效液相色谱法;有关物质
【中图分类号】R295 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0009-02
盐酸伊伐布雷定合成后有异构体存在,分别为R—异构体和S一盐异构体。R—异构体无药理活性,但通过在国内外较多研究资料表明R—异构体在制剂过程中并不发生转换,盐酸伊伐布雷定原料中控制了R-异构体含量,者制剂中不需检测。本文建立的HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片有关物质的方法,作为盐酸伊伐布雷定片的质量控制。现将其有关物质测定的研究资料总结如下。
1 仪器与试药
1.1仪器:日本岛津公司:LC-10ATvp输液泵、SPD—10Avp紫外检测器、ANASTAR色谱工作站。
1.2检测样品和试药: 盐酸伊伐布雷定片(江苏恒瑞医药股份有限公司提供测试样品:090301、090302、090303、090304、090305、090306),水为超纯水,色谱级乙腈(成都化学试剂厂生产),磷酸盐缓冲液为AR级。
2方法与结果
2.1色谱条件:
流动相:乙腈—pH7.6磷酸盐缓冲液(30:70—40:60)梯度洗脱(见表1),色谱柱:Kromasil C18柱(0.46cm×25cm,5μm),流速:1.0m/min,检测波长:220nm,柱温:25℃。
表1梯度洗脱表
时间(分钟)
乙腈(%)
pH7.6磷酸盐缓冲液(%)
0—20
30
70
20—30
30—40
40—50
40
40
30
60
60
70
50—60
30
70
2.2 制备供试品溶液:在同批号样品中取20片盐酸伊伐布雷定片,研细后,精密称定适量药粉,置10ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度(含量1mg/ml),摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3制备对照品溶液:精密吸取供试品溶液1mL,置100mI量瓶中,用流动相稀释制成1%的样品自身对照溶液。
2.4最低检测限:
分别称取盐酸伊伐布雷定适量,用流动相稀释成系列浓度的溶液,并精密吸取20?l,注入色谱仪中。结果表明:进样量为2.03ng时,峰高约变为基线噪音的3倍。故该条件下仪器对其成分的检测灵敏度高。
2.5精密度试验:
取品供试品溶液连续进样4次,每次20.0μl,将4次峰面积精密度计算,RSD=0.98%。
2.6稳定性实验:
取同一样品液分别在0h、1h、2h、4h、6h、8h进样检测,每次20μl,对所得的6次峰面积进行精密度计算,求得RSD为1.97%,表明样品盐酸伊伐布雷定片中有关物质在8h内稳定。
2.7重复性试验:
取同批号盐酸伊伐布雷定片20片,研细,按对角分样的原则分成6份,将每份样品按制备供试品溶液的方法制备样品液,进行有关物质测定,并根据线性关系计算有关物质量,样品中有关物质的平均質为0.62%,RSD为1.45%。
2.8 样品检测:
分别取6个批号盐酸伊伐布雷定片,按上述供试品溶液和对照品溶液的制备方法,制备样品液。分别量取样品也各20?l,进样检测。6批盐酸伊伐布雷定片的有关物质检测结果见表2
表2 6批盐酸伊伐布雷定片有关物质检测结果
批号
有关物质量(%)
批号
有关物质量(%)
090301
0.62
090304
0.62
090302
0.62
090305
0.63
090303
0.63
090306
0.62
3 讨论
盐酸伊伐布雷定片品是首例单纯减缓心率的有效药物,具有特殊降低心率的作用,不良反应小,其耐受性好,长期应用该药能有效改善改善心脏泵血的功能。盐酸伊伐布雷定片剂已在国外有销售,目前在国内尚未有厂家生产销售,是伊伐布雷定的盐酸盐[1],其化学名:3一(3一[[(7S)(3,4一二甲氧基苯并环丁烷[4.2.0]辛一1,3,5一三烯一7一基)甲基]一甲氨基]丙基)一1,3,4,5一四氢一7,8一二甲氧基一2—氢一3一苯并氮杂卓一2一酮盐酸盐。适用于不耐受或禁用β阻断剂和窦性心律正常的慢性稳定型心绞痛的患者[2],是第一个选择特异性作用于心脏起搏电流的抑制剂[3],具有特殊降低心率的作用,其耐受性好,不良反应小,长期应用伊伐布雷定片可有效改善心衰动物左心室的结构和功能、改善心脏泵血的功能。国内外有较多关于检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的研究,我们以上采用的HPLC法对其有关物质的检测,采用了流动相梯度洗脱的方法,节约了检测时间,并使各杂质峰都能很好地分离,使检测结果更为准确。
计算有关物质的方法:以自身溶液对照法计算杂质的含量。供试品溶液色谱图中若有杂质峰,其最大杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的一半,各杂质峰总面积不得大于对照液主峰面积的2倍。其测得有关物质的平均含量为0.62%,符合制剂中对有关物质的要求。
采用高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片的有关物质,该方法的重现性、精密度、分离度和稳定性等均符合相关要求,且灵敏度高,可用于盐酸伊伐布雷定片的有关物质控制。
参考文献
[1] 刘燕平,王德才.新型抗心绞痛药伊伐布雷定[J].中国新药杂志,2008,17(19):1718—1720.
[2] 高照,李法琦.伊伐布雷定减慢心率的研究现状[J].心血管病学进展,2009,30(6):995—998.
[3] 叶晓娟,吴勇,廖守主,等.伊伐布雷定的合成工艺改进[J].中国药物化学杂志,2010,20(2):106—109.