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【摘要】
目的：建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片中有关物质。方法：对HPLC检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的色谱条件、最低检测限、精密度、稳定性、重现性进行研究。结果：有关物质测定中，精密度检查RSD为0.98％，重复性实验RSD为1.45％，有关物质的平均值为0.62％，有关物质在8小时内稳定。结论：该方法具有简便、准确、可靠、灵敏度高的优点，适用于盐酸伊伐布雷定片剂的质量控制。
【关键词】盐酸伊伐布雷定片；高效液相色谱法；有关物质
【中图分类号】R295 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0009-02
盐酸伊伐布雷定合成后有异构体存在，分别为R—异构体和S一盐异构体。R—异构体无药理活性，但通过在国内外较多研究资料表明R—异构体在制剂过程中并不发生转换，盐酸伊伐布雷定原料中控制了R-异构体含量，者制剂中不需检测。本文建立的HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片有关物质的方法，作为盐酸伊伐布雷定片的质量控制。现将其有关物质测定的研究资料总结如下。
1 仪器与试药
1.1仪器：日本岛津公司:LC-10ATvp输液泵、SPD—10Avp紫外检测器、ANASTAR色谱工作站。
1.2检测样品和试药: 盐酸伊伐布雷定片(江苏恒瑞医药股份有限公司提供测试样品：090301、090302、090303、090304、090305、090306)，水为超纯水，色谱级乙腈（成都化学试剂厂生产），磷酸盐缓冲液为AR级。
2方法与结果
2.1色谱条件：
流动相：乙腈—pH7.6磷酸盐缓冲液(30：70—40：60)梯度洗脱(见表1),色谱柱：Kromasil C18柱(0.46cm×25cm，5μm)，流速：1.0m/min，检测波长：220nm，柱温：25℃。
表1梯度洗脱表
时间（分钟）
乙腈（%）
pH7.6磷酸盐缓冲液（%）
0—20
30
70
20—30
30—40
40—50
40
40
30
60
60
70
50—60
30
70
2.2 制备供试品溶液：在同批号样品中取20片盐酸伊伐布雷定片，研细后，精密称定适量药粉，置10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度(含量1mg/ml)，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3制备对照品溶液：精密吸取供试品溶液1mL，置100mI量瓶中，用流动相稀释制成1％的样品自身对照溶液。
2.4最低检测限：
分别称取盐酸伊伐布雷定适量，用流动相稀释成系列浓度的溶液，并精密吸取20?l，注入色谱仪中。结果表明：进样量为2.03ng时，峰高约变为基线噪音的3倍。故该条件下仪器对其成分的检测灵敏度高。
2.5精密度试验：
取品供试品溶液连续进样4次，每次20.0μl，将4次峰面积精密度计算，RSD=0.98%。
2.6稳定性实验：
取同一样品液分别在0h、1h、2h、4h、6h、8h进样检测，每次20μl，对所得的6次峰面积进行精密度计算，求得RSD为1.97%，表明样品盐酸伊伐布雷定片中有关物质在8h内稳定。
2.7重复性试验：
取同批号盐酸伊伐布雷定片20片，研细，按对角分样的原则分成6份，将每份样品按制备供试品溶液的方法制备样品液，进行有关物质测定，并根据线性关系计算有关物质量，样品中有关物质的平均質为0.62％，RSD为1.45％。
2.8 样品检测：
分别取6个批号盐酸伊伐布雷定片,按上述供试品溶液和对照品溶液的制备方法，制备样品液。分别量取样品也各20?l，进样检测。6批盐酸伊伐布雷定片的有关物质检测结果见表2
表2 6批盐酸伊伐布雷定片有关物质检测结果
批号
有关物质量（%）
批号
有关物质量（%）
090301
0.62
090304
0.62
090302
0.62
090305
0.63
090303
0.63
090306
0.62
3 讨论
盐酸伊伐布雷定片品是首例单纯减缓心率的有效药物，具有特殊降低心率的作用，不良反应小，其耐受性好，长期应用该药能有效改善改善心脏泵血的功能。盐酸伊伐布雷定片剂已在国外有销售，目前在国内尚未有厂家生产销售，是伊伐布雷定的盐酸盐［1］，其化学名：3一(3一［［(7S)(3,4一二甲氧基苯并环丁烷［4.2.0］辛一1,3,5一三烯一7一基)甲基］一甲氨基］丙基)一1,3,4,5一四氢一7,8一二甲氧基一2—氢一3一苯并氮杂卓一2一酮盐酸盐。适用于不耐受或禁用β阻断剂和窦性心律正常的慢性稳定型心绞痛的患者［2］，是第一个选择特异性作用于心脏起搏电流的抑制剂［3］，具有特殊降低心率的作用，其耐受性好，不良反应小，长期应用伊伐布雷定片可有效改善心衰动物左心室的结构和功能、改善心脏泵血的功能。国内外有较多关于检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的研究，我们以上采用的HPLC法对其有关物质的检测，采用了流动相梯度洗脱的方法，节约了检测时间，并使各杂质峰都能很好地分离，使检测结果更为准确。
计算有关物质的方法：以自身溶液对照法计算杂质的含量。供试品溶液色谱图中若有杂质峰，其最大杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的一半，各杂质峰总面积不得大于对照液主峰面积的2倍。其测得有关物质的平均含量为0.62％，符合制剂中对有关物质的要求。
采用高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片的有关物质，该方法的重现性、精密度、分离度和稳定性等均符合相关要求，且灵敏度高，可用于盐酸伊伐布雷定片的有关物质控制。
参考文献
［1］ 刘燕平，王德才．新型抗心绞痛药伊伐布雷定［J］．中国新药杂志，2008，17(19)：1718—1720．
［2］ 高照，李法琦．伊伐布雷定减慢心率的研究现状［J］．心血管病学进展，2009，30(6)：995—998．
［3］ 叶晓娟，吴勇，廖守主，等．伊伐布雷定的合成工艺改进［J］．中国药物化学杂志，2010，20(2)：106—109．
目的：建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片中有关物质。方法：对HPLC检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的色谱条件、最低检测限、精密度、稳定性、重现性进行研究。结果：有关物质测定中，精密度检查RSD为0.98％，重复性实验RSD为1.45％，有关物质的平均值为0.62％，有关物质在8小时内稳定。结论：该方法具有简便、准确、可靠、灵敏度高的优点，适用于盐酸伊伐布雷定片剂的质量控制。
【关键词】盐酸伊伐布雷定片；高效液相色谱法；有关物质
【中图分类号】R295 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0009-02
盐酸伊伐布雷定合成后有异构体存在，分别为R—异构体和S一盐异构体。R—异构体无药理活性，但通过在国内外较多研究资料表明R—异构体在制剂过程中并不发生转换，盐酸伊伐布雷定原料中控制了R-异构体含量，者制剂中不需检测。本文建立的HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片有关物质的方法，作为盐酸伊伐布雷定片的质量控制。现将其有关物质测定的研究资料总结如下。
1 仪器与试药
1.1仪器：日本岛津公司:LC-10ATvp输液泵、SPD—10Avp紫外检测器、ANASTAR色谱工作站。
1.2检测样品和试药: 盐酸伊伐布雷定片(江苏恒瑞医药股份有限公司提供测试样品：090301、090302、090303、090304、090305、090306)，水为超纯水，色谱级乙腈（成都化学试剂厂生产），磷酸盐缓冲液为AR级。
2方法与结果
2.1色谱条件：
流动相：乙腈—pH7.6磷酸盐缓冲液(30：70—40：60)梯度洗脱(见表1),色谱柱：Kromasil C18柱(0.46cm×25cm，5μm)，流速：1.0m/min，检测波长：220nm，柱温：25℃。
表1梯度洗脱表
时间（分钟）
乙腈（%）
pH7.6磷酸盐缓冲液（%）
0—20
30
70
20—30
30—40
40—50
40
40
30
60
60
70
50—60
30
70
2.2 制备供试品溶液：在同批号样品中取20片盐酸伊伐布雷定片，研细后，精密称定适量药粉，置10ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度(含量1mg/ml)，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3制备对照品溶液：精密吸取供试品溶液1mL，置100mI量瓶中，用流动相稀释制成1％的样品自身对照溶液。
2.4最低检测限：
分别称取盐酸伊伐布雷定适量，用流动相稀释成系列浓度的溶液，并精密吸取20?l，注入色谱仪中。结果表明：进样量为2.03ng时，峰高约变为基线噪音的3倍。故该条件下仪器对其成分的检测灵敏度高。
2.5精密度试验：
取品供试品溶液连续进样4次，每次20.0μl，将4次峰面积精密度计算，RSD=0.98%。
2.6稳定性实验：
取同一样品液分别在0h、1h、2h、4h、6h、8h进样检测，每次20μl，对所得的6次峰面积进行精密度计算，求得RSD为1.97%，表明样品盐酸伊伐布雷定片中有关物质在8h内稳定。
2.7重复性试验：
取同批号盐酸伊伐布雷定片20片，研细，按对角分样的原则分成6份，将每份样品按制备供试品溶液的方法制备样品液，进行有关物质测定，并根据线性关系计算有关物质量，样品中有关物质的平均質为0.62％，RSD为1.45％。
2.8 样品检测：
分别取6个批号盐酸伊伐布雷定片,按上述供试品溶液和对照品溶液的制备方法，制备样品液。分别量取样品也各20?l，进样检测。6批盐酸伊伐布雷定片的有关物质检测结果见表2
表2 6批盐酸伊伐布雷定片有关物质检测结果
批号
有关物质量（%）
批号
有关物质量（%）
090301
0.62
090304
0.62
090302
0.62
090305
0.63
090303
0.63
090306
0.62
3 讨论
盐酸伊伐布雷定片品是首例单纯减缓心率的有效药物，具有特殊降低心率的作用，不良反应小，其耐受性好，长期应用该药能有效改善改善心脏泵血的功能。盐酸伊伐布雷定片剂已在国外有销售，目前在国内尚未有厂家生产销售，是伊伐布雷定的盐酸盐［1］，其化学名：3一(3一［［(7S)(3,4一二甲氧基苯并环丁烷［4.2.0］辛一1,3,5一三烯一7一基)甲基］一甲氨基］丙基)一1,3,4,5一四氢一7,8一二甲氧基一2—氢一3一苯并氮杂卓一2一酮盐酸盐。适用于不耐受或禁用β阻断剂和窦性心律正常的慢性稳定型心绞痛的患者［2］，是第一个选择特异性作用于心脏起搏电流的抑制剂［3］，具有特殊降低心率的作用，其耐受性好，不良反应小，长期应用伊伐布雷定片可有效改善心衰动物左心室的结构和功能、改善心脏泵血的功能。国内外有较多关于检测盐酸伊伐布雷定片有关物质的研究，我们以上采用的HPLC法对其有关物质的检测，采用了流动相梯度洗脱的方法，节约了检测时间，并使各杂质峰都能很好地分离，使检测结果更为准确。
计算有关物质的方法：以自身溶液对照法计算杂质的含量。供试品溶液色谱图中若有杂质峰，其最大杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的一半，各杂质峰总面积不得大于对照液主峰面积的2倍。其测得有关物质的平均含量为0.62％，符合制剂中对有关物质的要求。
采用高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片的有关物质，该方法的重现性、精密度、分离度和稳定性等均符合相关要求，且灵敏度高，可用于盐酸伊伐布雷定片的有关物质控制。
参考文献
［1］ 刘燕平，王德才．新型抗心绞痛药伊伐布雷定［J］．中国新药杂志，2008，17(19)：1718—1720．
［2］ 高照，李法琦．伊伐布雷定减慢心率的研究现状［J］．心血管病学进展，2009，30(6)：995—998．
［3］ 叶晓娟，吴勇，廖守主，等．伊伐布雷定的合成工艺改进［J］．中国药物化学杂志，2010，20(2)：106—109．