论文部分内容阅读
【摘要】目的：对异嗜性抗体在甲状腺功能检测中的影响作用进行分析，并探讨排除和减少干扰的方法。方法：选取2013年1-12月间我院行促甲状腺激素检测并发病激素水平有不适当增高病例180例，取患者空腹静脉血离心处理获得血清，血清样本行聚乙二醇（PEG）沉淀法及标记抗体的固相放射免疫分析法（IRMA法）测定促甲状腺激素（TSH）水平，诊断出异嗜性抗体增多症6例，纳入研究组，其余174例纳入对照组。结果：研究组RIA法测定TSH水平显著低于IRMA法血清中和前检测结果，同时也显著低于对照组RIA法测定结果，数据间比较具有统计学差异（P<0.01）;IRMA法血清中和后TSH水平显著低于血清中和前，同时显著低于对照组血清中和后检测结果，数据间比较具有统计学差异（P<0.01）。两组间RIA法测定FT3与FT4的结果比较无统计学差异，且血清中和前、后的FT3或FT4水平组内比较无统计学差异（P>0.05）。结论：对于IRMA法检测TSH水平有不适当增高病例，应提高警惕，患者可能存在异嗜性抗体干扰，应进一步行RIA法测定，如结果有显著下降，说明异嗜性抗体的存在风险更高，一般可采用FEG法进行最终诊断与确定。
【关键词】异嗜性抗体;甲状腺功能指标;固相放射免疫分析法;检测价值
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）011- 0119-02
异嗜性抗体为免疫测定中一类严重影响检测结果的干扰因素，主要因其与受检物质具有相似活性但化学结构不同引起[1]。在检验过程中，如忽略异嗜性抗体作用，对于检验结果的准确性与特异性具有极大影响，甚至增大了临床用药的风险[2]。有报道显示，饲养宠物兔的受检人群内，约有30%-40%比例能检测出异嗜性抗体存在，而当中约有0.05%-0.5%的免疫测定受到异嗜性抗体干扰[3]。在甲状腺功能检测中，异嗜性抗体的干扰易影响检测结果，使测定的激素水平与实际情况不符，影响临床的诊治与预后。现对异嗜性抗体在甲状腺功能检测中的影响作用进行分析，并探讨排除和减少干扰的方法，希望为提高临床诊断甲状腺水平的准确性提出建议。
1 资料与方法
1.1一般资料
选取2013年1-12月间我院行促甲状腺激素检测并发病激素水平有不适当增高病例180例，包括男性102例，女性78例，平均年龄（43.8±12.6）岁，平均病程（9.5±5.2）个月。
1.2方法
1.2.1试剂与仪器
游离T3、T4、TSH试剂盒为美国诊断试剂公司产品;血清甲状腺球蛋白抗体（TGAb）及血清甲状腺微粒体抗体（TMAb）放免试剂盒为上海生物制品研究所产品;人血清TSH放免试剂盒为北京东免东雅生物技术研究所产品。离心机为德国贺利氏公司产品，型号Megafuge2R型;自动蛋白分析仪为美国贝克曼公司产品，型号Array360;放射免疫计数器为西安利亚公司产品，型号Cap-r16。
1.2.2检测方法
对临床患者均抽取空腹静脉血进行离心处理，留取血清部分，置于-20℃下保存待测。采用标记抗原的固相放射免疫分析法（RIA法）对各患者血清样本测定游离三碘甲腺原氨酸（FT3）和游离四碘甲腺原氨酸（FT4）水平，采用标记抗体的固相放射免疫分析法（IRMA法）进行促甲状腺激素（TSH）水平的测定。根据测定结果，选取TSH不适当增高病例重复实施FT3与FT4水平检测，以排除随机误差样本。剩余血清样本应用RIA法进行TSH水平的测定，如TSH水平有显著下降，则采用速率散射比浊法检测，以排除风湿因子的干扰。剩余样本纳入本组研究样本。
取究样本血清0.5 mL置入试管，加入牛、羊、鼠、猪的非免疫动物混合血清50μL，孵育至聚乙二醇（PEG）沉淀出现，应用IRMA法再次进行TSH水平的检测。评价检测结果，如TSH≥5 UIU/mL，且与患者临床表现及RIA测定结果一致，则诊断为异嗜性抗体增多症[4]。
1.2.3分组方法
根据检测结果，将诊断为异嗜性抗体增多症的6例病例纳入研究组，包括男性4例，女性2例，平均年龄（43.6±11.8）岁，平均病程（9.2±4.8）个月;其余174例病例纳入对照组，包括男性98例，女性76例，平均年龄（44.1±12.3）岁，平均病程（9.6±5.3）个月。两组病例在年龄、性别及病程方面比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.3统计学处理
数据处理软件为SAS12.0，组间数据比较采用t检验，当P<0.05时表示数据间差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 TSH水平测定结果比较
如表1所示，研究组RIA法测定TSH水平显著低于IRMA法血清中和前检测结果，同时也显著低于对照组RIA法测定结果，数据间比较具有统计学差异（P<0.01）;IRMA法血清中和后TSH水平显著低于血清中和前，同时显著低于对照组血清中和后检测结果，数据间比较具有统计学差异（P<0.01）。
2.2 FT3与FT4测定结果比较
如表2所示，两组间RIA法测定FT3与FT4的结果比较无统计学差异，且血清中和前、后的FT3或FT4水平组内比较无统计学差异（P>0.05）。
3 讨论
FT3、FT4和TSH为临床甲状腺功能检测的三项常见指标，对甲亢、甲减等甲状腺功能异常的诊断具有重要的应用价值[5]。行甲状腺功能检测时，如存在抗体的干扰，很可能影响检测数据，造成诊断结果的偏差或不真实，影响治疗与预后。在甲状腺功能检测中可能起到干扰作用的抗体有多种，包括甲状腺激素自身抗体、类风湿因子和异嗜性抗体。异嗜性抗体的产生机制目前尚不明确，是一种经由抗原刺激而产生的足够滴度的特异性免疫球蛋白。已知异嗜性抗体具有较低的亲和力，与多种不同种属的免疫球蛋白均可发生弱交叉反应，以此来干扰TSH的免疫学检测[6]。
异嗜性抗体的来源很多，比如接触饲养宠物、进食污染食品、灭菌不完全的鲜奶、接种动物血清、接受免疫疗法等。异嗜性抗体对甲状腺功能检测结果的影响作用主要通过对双位点免疫分析的干扰而产生。IRMA法为双位点夹心免疫分析法，由于异嗜性抗体具有与多种种属动物免疫球蛋白弱结合的特征，因而此法可利用异嗜性抗体与标记抗体及包被抗体的结合，使TSH的检测结果呈现假性增高，进而鉴别异嗜性抗体增多症。对异嗜性抗体增多的血清样本采用PEG沉淀法观察抗原抗体复合物，有利于清除或减少异嗜性抗体在试验过程中起到的干扰作用，从而提高诊断数据的准确性。本组研究结果表明，异嗜性抗体血清样本采用RIA法检测TSH水平有明显异常，采用IRMA法血清中和后的检测结果有明显异常，证实FEG法具有一定排除干扰的作用。
由本组研究可见，对于IRMA法检测TSH水平有不适当增高病例，应提高警惕，患者可能存在异嗜性抗体干扰，应进一步行RIA法测定，如结果有显著下降，说明异嗜性抗体的存在风险更高，一般可采用FEG法进行最终诊断与确定。
参考文献：
[1] 韦维，戴盛明. 异嗜性抗体在免疫测定中干扰的研究进展[J]. 国际检验医学杂志，2010，31（10）：1123-1124.
[2] 刘晓民，王晶，徐岩松，等. 甲状腺素自身抗体对甲状腺素测定干扰作用的研究[J]. 中华内科杂志，2011，40（11）：771-772.
[3] 李金万，李钰，戴圣明. 内源性干扰对免疫分析的影响[J]. 国际医学检验杂志，2010，10（10）：1167-1169.
[4] 蒋利君，黎宇，戴盛明. 异嗜性抗体对免疫测定干扰的研究进展[J]. 分子诊断与治疗杂志，2010，2（1）：68-70.，
[5] 王焰，黄晓雪，马莉，等. 异嗜性抗体对化学发光检测结果的影响[J]. 贵阳医学院学报，2013，38（1）：94-96.
[6] 马荣. 低PH孵放法灭活生物制品中异嗜性小鼠白血病毒的方法学研究[D]. 中国中医科学院博士学位论文，2013：78-88.
【关键词】异嗜性抗体;甲状腺功能指标;固相放射免疫分析法;检测价值
【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）011- 0119-02
异嗜性抗体为免疫测定中一类严重影响检测结果的干扰因素，主要因其与受检物质具有相似活性但化学结构不同引起[1]。在检验过程中，如忽略异嗜性抗体作用，对于检验结果的准确性与特异性具有极大影响，甚至增大了临床用药的风险[2]。有报道显示，饲养宠物兔的受检人群内，约有30%-40%比例能检测出异嗜性抗体存在，而当中约有0.05%-0.5%的免疫测定受到异嗜性抗体干扰[3]。在甲状腺功能检测中，异嗜性抗体的干扰易影响检测结果，使测定的激素水平与实际情况不符，影响临床的诊治与预后。现对异嗜性抗体在甲状腺功能检测中的影响作用进行分析，并探讨排除和减少干扰的方法，希望为提高临床诊断甲状腺水平的准确性提出建议。
1 资料与方法
1.1一般资料
选取2013年1-12月间我院行促甲状腺激素检测并发病激素水平有不适当增高病例180例，包括男性102例，女性78例，平均年龄（43.8±12.6）岁，平均病程（9.5±5.2）个月。
1.2方法
1.2.1试剂与仪器
游离T3、T4、TSH试剂盒为美国诊断试剂公司产品;血清甲状腺球蛋白抗体（TGAb）及血清甲状腺微粒体抗体（TMAb）放免试剂盒为上海生物制品研究所产品;人血清TSH放免试剂盒为北京东免东雅生物技术研究所产品。离心机为德国贺利氏公司产品，型号Megafuge2R型;自动蛋白分析仪为美国贝克曼公司产品，型号Array360;放射免疫计数器为西安利亚公司产品，型号Cap-r16。
1.2.2检测方法
对临床患者均抽取空腹静脉血进行离心处理，留取血清部分，置于-20℃下保存待测。采用标记抗原的固相放射免疫分析法（RIA法）对各患者血清样本测定游离三碘甲腺原氨酸（FT3）和游离四碘甲腺原氨酸（FT4）水平，采用标记抗体的固相放射免疫分析法（IRMA法）进行促甲状腺激素（TSH）水平的测定。根据测定结果，选取TSH不适当增高病例重复实施FT3与FT4水平检测，以排除随机误差样本。剩余血清样本应用RIA法进行TSH水平的测定，如TSH水平有显著下降，则采用速率散射比浊法检测，以排除风湿因子的干扰。剩余样本纳入本组研究样本。
取究样本血清0.5 mL置入试管，加入牛、羊、鼠、猪的非免疫动物混合血清50μL，孵育至聚乙二醇（PEG）沉淀出现，应用IRMA法再次进行TSH水平的检测。评价检测结果，如TSH≥5 UIU/mL，且与患者临床表现及RIA测定结果一致，则诊断为异嗜性抗体增多症[4]。
1.2.3分组方法
根据检测结果，将诊断为异嗜性抗体增多症的6例病例纳入研究组，包括男性4例，女性2例，平均年龄（43.6±11.8）岁，平均病程（9.2±4.8）个月;其余174例病例纳入对照组，包括男性98例，女性76例，平均年龄（44.1±12.3）岁，平均病程（9.6±5.3）个月。两组病例在年龄、性别及病程方面比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.3统计学处理
数据处理软件为SAS12.0，组间数据比较采用t检验，当P<0.05时表示数据间差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 TSH水平测定结果比较
如表1所示，研究组RIA法测定TSH水平显著低于IRMA法血清中和前检测结果，同时也显著低于对照组RIA法测定结果，数据间比较具有统计学差异（P<0.01）;IRMA法血清中和后TSH水平显著低于血清中和前，同时显著低于对照组血清中和后检测结果，数据间比较具有统计学差异（P<0.01）。
2.2 FT3与FT4测定结果比较
如表2所示，两组间RIA法测定FT3与FT4的结果比较无统计学差异，且血清中和前、后的FT3或FT4水平组内比较无统计学差异（P>0.05）。
3 讨论
FT3、FT4和TSH为临床甲状腺功能检测的三项常见指标，对甲亢、甲减等甲状腺功能异常的诊断具有重要的应用价值[5]。行甲状腺功能检测时，如存在抗体的干扰，很可能影响检测数据，造成诊断结果的偏差或不真实，影响治疗与预后。在甲状腺功能检测中可能起到干扰作用的抗体有多种，包括甲状腺激素自身抗体、类风湿因子和异嗜性抗体。异嗜性抗体的产生机制目前尚不明确，是一种经由抗原刺激而产生的足够滴度的特异性免疫球蛋白。已知异嗜性抗体具有较低的亲和力，与多种不同种属的免疫球蛋白均可发生弱交叉反应，以此来干扰TSH的免疫学检测[6]。
异嗜性抗体的来源很多，比如接触饲养宠物、进食污染食品、灭菌不完全的鲜奶、接种动物血清、接受免疫疗法等。异嗜性抗体对甲状腺功能检测结果的影响作用主要通过对双位点免疫分析的干扰而产生。IRMA法为双位点夹心免疫分析法，由于异嗜性抗体具有与多种种属动物免疫球蛋白弱结合的特征，因而此法可利用异嗜性抗体与标记抗体及包被抗体的结合，使TSH的检测结果呈现假性增高，进而鉴别异嗜性抗体增多症。对异嗜性抗体增多的血清样本采用PEG沉淀法观察抗原抗体复合物，有利于清除或减少异嗜性抗体在试验过程中起到的干扰作用，从而提高诊断数据的准确性。本组研究结果表明，异嗜性抗体血清样本采用RIA法检测TSH水平有明显异常，采用IRMA法血清中和后的检测结果有明显异常，证实FEG法具有一定排除干扰的作用。
由本组研究可见，对于IRMA法检测TSH水平有不适当增高病例，应提高警惕，患者可能存在异嗜性抗体干扰，应进一步行RIA法测定，如结果有显著下降，说明异嗜性抗体的存在风险更高，一般可采用FEG法进行最终诊断与确定。
参考文献：
[1] 韦维，戴盛明. 异嗜性抗体在免疫测定中干扰的研究进展[J]. 国际检验医学杂志，2010，31（10）：1123-1124.
[2] 刘晓民，王晶，徐岩松，等. 甲状腺素自身抗体对甲状腺素测定干扰作用的研究[J]. 中华内科杂志，2011，40（11）：771-772.
[3] 李金万，李钰，戴圣明. 内源性干扰对免疫分析的影响[J]. 国际医学检验杂志，2010，10（10）：1167-1169.
[4] 蒋利君，黎宇，戴盛明. 异嗜性抗体对免疫测定干扰的研究进展[J]. 分子诊断与治疗杂志，2010，2（1）：68-70.，
[5] 王焰，黄晓雪，马莉，等. 异嗜性抗体对化学发光检测结果的影响[J]. 贵阳医学院学报，2013，38（1）：94-96.
[6] 马荣. 低PH孵放法灭活生物制品中异嗜性小鼠白血病毒的方法学研究[D]. 中国中医科学院博士学位论文，2013：78-88.