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摘要 ：目的： 探究和分析STMN1蛋白及EPCAM在食管鳞状细胞癌组织的表达及其在食管鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用。方法： 采用免疫组织化学方法对100例食管鳞状细胞癌中的STMN1蛋白和EPCAM的表達水平，在将STMN1siRNA转染于食管癌细胞后，对转染效果进行检测，观察转染的STMN1siRNA对于癌细胞的侵袭和转移的影响作用，采用同样的方法对癌细胞中EPCAM的表达水平和对于鳞状细胞癌的侵袭和转移的影响作用。结果： 在实验后，结果显示STMN1在食管鳞状细胞癌组织中呈现高表达，而且与淋巴转移有较为显著地相关性。而EPCAM在患者的癌细胞中呈现阳性表达，与淋巴转移无相关性，反而与侵袭的深度有一定的相关性。siRNA干扰STMN1的表达，能够较为明显的抑制癌细胞的侵袭和转移能力。结论： STMN1能够促进食管鳞状细胞癌组织侵袭和转移的发生，EPCAM则在癌细胞中表达阳性与癌细胞的侵袭深度有关。
关键词： STMN1；食管鳞状细胞癌；侵袭；转移；EPCAM
食管癌是一种较为常见的肿瘤之一，有关文献报道，在世界范围内肿瘤疾病导致的死亡原因中高居第6位[1]。在我国，食管癌也是一种病死率较高的肿瘤疾病，在癌症致死原因中高居第4位[2]。食管癌主要包括食管鳞状细胞癌和食管腺癌。而在我国食管鳞状细胞癌占食管癌病例中的90%，食管鳞状细胞癌主要发生局部或者是远处的侵袭和转移，是导致患者预后不良最为常见的原因之一，而对于其发生的机制目前还没有较为明确的定论。在临床上，对于食管鳞状细胞癌的侵袭和转移的相关分子以及其机制的探究在早期诊断和临床干预等方面具有较为重要的意义和价值。STMN1是一种能够在细胞的有丝分裂期和分裂期改变微管动力学的蛋白质[3]，在很多中癌细胞中表达增加，主要参与了细胞的增殖、细胞运动、微管动力学调节和周期调节等功能[4]。有关报道曾报道过STMN1是一种转移相关的基因，而对于食管鳞状细胞癌组织中STMN1的侵袭和转移相关性则没有太多的阐明。也有人提出食管癌鳞状细胞癌可能是一种干细胞癌[5]。本次研究就是通过对100例食管鳞状细胞癌中STMN1蛋白以及干细胞标志EPCAM的表达水平的检测，并分析在食管鳞状细胞癌的侵袭和转移中的作用和影响。以下是本次研究的具体内容。
1资料与方法
1.1一般资料
本次接受研究的食管鳞状细胞癌患者入院前均未接受化疗、放疗和其他的治疗。患者中男性患者66例，女性患者34例，年龄在39-80岁之间，平均年龄为（58.2±1.3）岁；按肿瘤的分化程度分类：高分化52例，中分化36例，低分化或未分化12例；这100例患者中有淋巴结转移者56例，无淋巴结转移者44例，详见表1。
表1.患者的一般资料的数据[n]
1.2方法
1.2.1siRNA转染实验
主要是按照LipofectamineTM2000说明书中所表示的[6]，进行瞬时转染步骤，转染6小时后对培养液进行更换，72小时后收取细胞进行相应的实验。
1.2.2细胞的侵袭和转移实验
（1）采用Matrigel1：8进行稀释，包被Millicell小室的底部摸的上室面，将其置于37℃的温度环境下30min，使之凝结成凝胶。（2）消化细胞，在消化终止后，进行离心处理除去培养液，再用适量的无血清培养基进行重悬。（3）取细胞悬浮液100μL加入到Millicell小室上层，而在小室的下层加入500μL培养液，培养时间为48小时。（4）最后对结果进行统计，在200倍的显微镜下选取5个视野观察细胞进行计数。
1.2.3免疫组化的方法
首先，将组织芯片进行常规的脱蜡直至水化；再放入柠檬酸盐抗原修复液中进行高压修复2分钟，待自然冷却后进行PBS液洗；再以3%的过氧化氢温室孵育15分钟，而后同样采用PBS液洗；而后滴加山羊血清，再用PBS液洗；再将DAB底物工作液滴加于切片之上，在显微镜下控制显色，随后使用自来水终止显色；使用苏木素进行复染；采用常规乙醇进行脱水。
1.3统计学方法
本次研究所得数据采用SPSS16.0软件进行处理，对比检验方法采用X2检验，若P<0.05则说明差异较为明显，具有一定的统计学意义，反之，则表示无统计学意义。
1.4表达效果的判定标准
（1）主要是按照细胞着色情况进行分类，细胞无显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色2分，棕褐色为3分；而后再按照阳性细胞百分比进行评分，小于30%为1分，30%-70%为2分，大于70%为3分。取两次判定评分的乘积作为总积分，0-1分为阴性（-），2-3分为弱阳性（+），4-6分为阳性（++），7分以上为强阳性（+++）。
（2）取随机采集的10个较有代表性的视野进行计数统计，并取其平均值，同样以染色作为判定标准，胞质或包膜有棕黄色颗粒沉着为阳性染色，依照阳性细胞百分率判定阳性强度，阳性细胞数<10%为阴性，相反为阳性。
2结果
2.1STMN1表达水平的比较结果
对100例患者的食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织STMN1蛋白的表达水平进行评定，在癌组织中STMN1的阳性表达率为72.0%，而癌旁正常组织STMN1蛋白的阳性表达率仅为32.0%，癌组织的表达率明显高于正常组织，差异较为的明显，具有一定的统计学意义（P<0.05），详见表2。
表2.STMN1表达水平的比较结果[n]
2.2转染前后对癌细胞的侵袭和转移能力的比较结果
实验结果表明，在采取了特异性的siRNA沉默STMN1的表达后，食管鳞状细胞癌的细胞侵袭和转移能力有较为明显的减弱。
2.3EPCAM阳性表达结果 对于100例食管癌患者进行癌组织和周围正常组织进行EPCAM阳性表达率的比较，癌组织的阳性表达率高达68.0%，而周围正常组织的EPCAM阳性表达率仅为19.0%，差异较为明显，具有一定的统计学意义（P<0.05），详见表3。
表3.EPCAM阳性表达率的比较结果[%]
2.4 EPCAM与癌细胞侵袭和转移的关系
通过本次试验研究，EPCAM主要与癌细胞的侵润深度有一定的相关性，与有无淋巴结转移无相关性。
3结论
癌细胞的转移和侵袭是对于食管癌鳞状细胞癌患者的预后产生不利影响的主要因素，故此对于癌细胞的转移和侵袭影响因素的研究就显得十分的必要和重要。
STMN1是一种能够在细胞有丝分裂期和分裂间期改变微管動力学的蛋白质。本次研究主要想通过对食管鳞状细胞癌中STMN1的表达水平和其对于细胞癌的侵袭和转移的影响进行分析。
EPCAM是一种表达于人类部分正常上皮组织和大多数恶性上皮肿瘤细胞表面。有关文献曾表达过，对于很多常见的肿瘤性疾病，EPCAM的表达水平接近100%，主要包括乳腺癌、食管癌、胃癌、结肠癌等[7]。
通过采取对食管癌组织进行免疫组化的实验，检测STMN1的表达水平。结果显示，在癌组织STMN1中的表达水平较高，而且STMN1表达阳性者相比较表达阴性者伴有更多的细胞侵袭和转移。说明对于食管鳞状细胞癌的患者，表达STMN1阳性者相对于表达阴性者在临床上治愈效果较差。
同样实验中表明EPCAM在癌细胞中表达也很高，对于癌细胞的侵袭和转移也有很大的影响作用，主要是能够促进肿瘤细胞的转移，而癌细胞的侵润深度越强其转移能力也就相应的越强。
相比较癌细胞表达STMN1阳性者，对于患者的预后也有一定的负面影响。主要原因可能是与STMN1对于癌细胞的侵袭和转移有促进作用有关。而EPCAM对于癌细胞的转移主要取决于癌细胞的侵润深度，这在临床治疗上是一个难题，有待解决。
综上，STMN1和EPCAM均在食管癌鳞状细胞癌中呈现较为强烈的阳性表达，同时，对于癌细胞的转移和侵袭有一定的相关性，并且对患者的预后会产生很多的负面影响。临床治疗上有待进一步的解决。
参考文献：
[1]Schweigert M，Dubecz A，Stein HJ.Oesophageal canceran overview[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol，2013，10（4）：230-244.
[2]钟钏，谭家驹，徐致祥.食管癌流行病学病因学研究进展[J].河南预防医学杂志，2011，22（1）：1-10.
[3]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.
[4]Kang W，Tong JH，Chan AW，et al.Stathminl plays oncogenic role and is a target of microrna-223 in gastric cancer[J].PLoS One，2012，7（3）：e33919.
[5]Du W，Ji H，Cao S，et al.EPCAM：a potential antimetastatic target for gastric cancer[J].Dig Dis Sci，2010，55（8）：2165-2171.
[6]朱鸿武，江丹，谢子英，等.STMN1再食管鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用及其预后意义[J].重庆医学，2015，44（7）：865-869.
[7]潘群雄，苏子剑，王聪仁，等.EPCAM在食管鳞状细胞癌中的表达及其预后的关系[J].中国老年学杂志，2013，20：5065-5067.
关键词： STMN1；食管鳞状细胞癌；侵袭；转移；EPCAM
食管癌是一种较为常见的肿瘤之一，有关文献报道，在世界范围内肿瘤疾病导致的死亡原因中高居第6位[1]。在我国，食管癌也是一种病死率较高的肿瘤疾病，在癌症致死原因中高居第4位[2]。食管癌主要包括食管鳞状细胞癌和食管腺癌。而在我国食管鳞状细胞癌占食管癌病例中的90%，食管鳞状细胞癌主要发生局部或者是远处的侵袭和转移，是导致患者预后不良最为常见的原因之一，而对于其发生的机制目前还没有较为明确的定论。在临床上，对于食管鳞状细胞癌的侵袭和转移的相关分子以及其机制的探究在早期诊断和临床干预等方面具有较为重要的意义和价值。STMN1是一种能够在细胞的有丝分裂期和分裂期改变微管动力学的蛋白质[3]，在很多中癌细胞中表达增加，主要参与了细胞的增殖、细胞运动、微管动力学调节和周期调节等功能[4]。有关报道曾报道过STMN1是一种转移相关的基因，而对于食管鳞状细胞癌组织中STMN1的侵袭和转移相关性则没有太多的阐明。也有人提出食管癌鳞状细胞癌可能是一种干细胞癌[5]。本次研究就是通过对100例食管鳞状细胞癌中STMN1蛋白以及干细胞标志EPCAM的表达水平的检测，并分析在食管鳞状细胞癌的侵袭和转移中的作用和影响。以下是本次研究的具体内容。
1资料与方法
1.1一般资料
本次接受研究的食管鳞状细胞癌患者入院前均未接受化疗、放疗和其他的治疗。患者中男性患者66例，女性患者34例，年龄在39-80岁之间，平均年龄为（58.2±1.3）岁；按肿瘤的分化程度分类：高分化52例，中分化36例，低分化或未分化12例；这100例患者中有淋巴结转移者56例，无淋巴结转移者44例，详见表1。
表1.患者的一般资料的数据[n]
1.2方法
1.2.1siRNA转染实验
主要是按照LipofectamineTM2000说明书中所表示的[6]，进行瞬时转染步骤，转染6小时后对培养液进行更换，72小时后收取细胞进行相应的实验。
1.2.2细胞的侵袭和转移实验
（1）采用Matrigel1：8进行稀释，包被Millicell小室的底部摸的上室面，将其置于37℃的温度环境下30min，使之凝结成凝胶。（2）消化细胞，在消化终止后，进行离心处理除去培养液，再用适量的无血清培养基进行重悬。（3）取细胞悬浮液100μL加入到Millicell小室上层，而在小室的下层加入500μL培养液，培养时间为48小时。（4）最后对结果进行统计，在200倍的显微镜下选取5个视野观察细胞进行计数。
1.2.3免疫组化的方法
首先，将组织芯片进行常规的脱蜡直至水化；再放入柠檬酸盐抗原修复液中进行高压修复2分钟，待自然冷却后进行PBS液洗；再以3%的过氧化氢温室孵育15分钟，而后同样采用PBS液洗；而后滴加山羊血清，再用PBS液洗；再将DAB底物工作液滴加于切片之上，在显微镜下控制显色，随后使用自来水终止显色；使用苏木素进行复染；采用常规乙醇进行脱水。
1.3统计学方法
本次研究所得数据采用SPSS16.0软件进行处理，对比检验方法采用X2检验，若P<0.05则说明差异较为明显，具有一定的统计学意义，反之，则表示无统计学意义。
1.4表达效果的判定标准
（1）主要是按照细胞着色情况进行分类，细胞无显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色2分，棕褐色为3分；而后再按照阳性细胞百分比进行评分，小于30%为1分，30%-70%为2分，大于70%为3分。取两次判定评分的乘积作为总积分，0-1分为阴性（-），2-3分为弱阳性（+），4-6分为阳性（++），7分以上为强阳性（+++）。
（2）取随机采集的10个较有代表性的视野进行计数统计，并取其平均值，同样以染色作为判定标准，胞质或包膜有棕黄色颗粒沉着为阳性染色，依照阳性细胞百分率判定阳性强度，阳性细胞数<10%为阴性，相反为阳性。
2结果
2.1STMN1表达水平的比较结果
对100例患者的食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织STMN1蛋白的表达水平进行评定，在癌组织中STMN1的阳性表达率为72.0%，而癌旁正常组织STMN1蛋白的阳性表达率仅为32.0%，癌组织的表达率明显高于正常组织，差异较为的明显，具有一定的统计学意义（P<0.05），详见表2。
表2.STMN1表达水平的比较结果[n]
2.2转染前后对癌细胞的侵袭和转移能力的比较结果
实验结果表明，在采取了特异性的siRNA沉默STMN1的表达后，食管鳞状细胞癌的细胞侵袭和转移能力有较为明显的减弱。
2.3EPCAM阳性表达结果 对于100例食管癌患者进行癌组织和周围正常组织进行EPCAM阳性表达率的比较，癌组织的阳性表达率高达68.0%，而周围正常组织的EPCAM阳性表达率仅为19.0%，差异较为明显，具有一定的统计学意义（P<0.05），详见表3。
表3.EPCAM阳性表达率的比较结果[%]
2.4 EPCAM与癌细胞侵袭和转移的关系
通过本次试验研究，EPCAM主要与癌细胞的侵润深度有一定的相关性，与有无淋巴结转移无相关性。
3结论
癌细胞的转移和侵袭是对于食管癌鳞状细胞癌患者的预后产生不利影响的主要因素，故此对于癌细胞的转移和侵袭影响因素的研究就显得十分的必要和重要。
STMN1是一种能够在细胞有丝分裂期和分裂间期改变微管動力学的蛋白质。本次研究主要想通过对食管鳞状细胞癌中STMN1的表达水平和其对于细胞癌的侵袭和转移的影响进行分析。
EPCAM是一种表达于人类部分正常上皮组织和大多数恶性上皮肿瘤细胞表面。有关文献曾表达过，对于很多常见的肿瘤性疾病，EPCAM的表达水平接近100%，主要包括乳腺癌、食管癌、胃癌、结肠癌等[7]。
通过采取对食管癌组织进行免疫组化的实验，检测STMN1的表达水平。结果显示，在癌组织STMN1中的表达水平较高，而且STMN1表达阳性者相比较表达阴性者伴有更多的细胞侵袭和转移。说明对于食管鳞状细胞癌的患者，表达STMN1阳性者相对于表达阴性者在临床上治愈效果较差。
同样实验中表明EPCAM在癌细胞中表达也很高，对于癌细胞的侵袭和转移也有很大的影响作用，主要是能够促进肿瘤细胞的转移，而癌细胞的侵润深度越强其转移能力也就相应的越强。
相比较癌细胞表达STMN1阳性者，对于患者的预后也有一定的负面影响。主要原因可能是与STMN1对于癌细胞的侵袭和转移有促进作用有关。而EPCAM对于癌细胞的转移主要取决于癌细胞的侵润深度，这在临床治疗上是一个难题，有待解决。
综上，STMN1和EPCAM均在食管癌鳞状细胞癌中呈现较为强烈的阳性表达，同时，对于癌细胞的转移和侵袭有一定的相关性，并且对患者的预后会产生很多的负面影响。临床治疗上有待进一步的解决。
参考文献：
[1]Schweigert M，Dubecz A，Stein HJ.Oesophageal canceran overview[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol，2013，10（4）：230-244.
[2]钟钏，谭家驹，徐致祥.食管癌流行病学病因学研究进展[J].河南预防医学杂志，2011，22（1）：1-10.
[3]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.
[4]Kang W，Tong JH，Chan AW，et al.Stathminl plays oncogenic role and is a target of microrna-223 in gastric cancer[J].PLoS One，2012，7（3）：e33919.
[5]Du W，Ji H，Cao S，et al.EPCAM：a potential antimetastatic target for gastric cancer[J].Dig Dis Sci，2010，55（8）：2165-2171.
[6]朱鸿武，江丹，谢子英，等.STMN1再食管鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用及其预后意义[J].重庆医学，2015，44（7）：865-869.
[7]潘群雄，苏子剑，王聪仁，等.EPCAM在食管鳞状细胞癌中的表达及其预后的关系[J].中国老年学杂志，2013，20：5065-5067.