【摘 要】
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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种发生于中枢神经系统的退行性病变。该病的病理学特征主要涉及Aβ沉积、Tau蛋白过度磷酸化、炎症反应、神经细胞凋亡、突触丢失
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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种发生于中枢神经系统的退行性病变。该病的病理学特征主要涉及Aβ沉积、Tau蛋白过度磷酸化、炎症反应、神经细胞凋亡、突触丢失和颗粒空泡变性,氧化应激、神经细胞钙稳态失调、AD相关基因突变及多态性等机制相关。AD原因错综复杂,目前,越来越多的研究证实,神经炎症机制在阿尔茨海默病的发生和发展进程中发挥了重要作用。在炎性反应中,LPS受体(CD14)与阿尔茨海默病的发生和发展进程有关,CD14与LPS结合,介导细胞对LPS-MD-2与TLR(Toll-like recepter,TLR)4复合物的识别,而且,CD14参与小胶质细胞介导的炎性反应,调节阿尔茨海默病的Aβ摄取和沉积,我们以前的研究已经证实CD14基因改变AD的遗传易感性。 目的: 提出CD14基因遗传多态性可能为AD的遗传风险因子,而外周血单核细胞CD14基因和蛋白表达量可能为AD的早期诊断生物标志。 方法: 本研究采用美国神经病学、语言障碍和卒中研究所-老年性痴呆和相关疾病学会(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD(probable)"标准,选择AD患者63例(年龄≥65岁,民族为汉族,女性31例,平均年龄74.25±15.71岁),并选择同期就诊的64例健康查体者作为对照(女性32例,平均年龄73.62±15.27岁)。所有研究对象均为中国北方汉族人且无亲缘关系。所有入选病人均抽取清晨空腹血各5.5mLEDTA抗凝,应用RNA提取纯化试剂盒(美国Promega),从外周血单核细胞提取总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术、流式细胞术分别对mRNA、血浆蛋白表达进行检测。基因组DNA提取按照外周血白细胞DNA提取标准程序,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测中国汉族AD人群和健康对照人群CD14rs2569190(-159t/C)和CD14rs2569191(-1145g/A)基因遗传多态性,使用SPSS17.0统计软件进行统计分析。AD组和对照组各种特征的比较采用t检验或卡方检验。多组之间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用Bonferroni法,P<0.05为差异有统计学意义。所有统计学检验均为双侧概率检验,以P﹤0.05为差异有统计学意义的标准。 结果: AD组和对照组相比,在年龄和性别匹配的63例AD患者和64例健康对照人群中,AD组中CD14mRNA的表达(0.392±0.214)明显高于对照组(0.284士0.172,P<0.01)。AD组中CD14的蛋白表达(68.08±10.59%)也显著高于对照组(39.91±10.36%,P<0.01)。且无论在AD组还是对照组,CD14mRNA的表达均与CD14蛋白的表达显著相关(分别为CD14:r=0.982和0.914,P<0.01;)。 实验证实CD14基因中CD14rs2569190(-159T/C)及CD14rs2569191(-1145G/A)2个位点的基因多态性和AD有关,2个位点基因型频率分布均符合Hardy–Weinberg平衡,在中国北方汉族人群中,CD14基因中CD14rs2569190(-159T/C)及CD14rs2569191(-1145G/A)2个SNPs位点基因型TT和GG在AD组和对照组中分布有显著性差异。 结论: 本实验首次对中国北方汉族人群CD14在AD患者外周血中mRNA和血浆蛋白水平的表达进行研究,AD组CD14mRNA及其蛋白水平明显增加,而且CD14mRNA水平与CD14的蛋白表达有明显的相关性,证明中国北方汉族人群CD14基因表达与AD易感性有关。下一步有待于扩大样本继续检测中国北方汉族人群CD14基因位点与AD易感性的关系。
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