【摘 要】
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为进一步研究纯化红枣多糖及硫酸化修饰产物的结构与生物活性之间的关系,本文采用红枣粗多糖（ZJP）为实验原料,DEAE-52离子交换色谱及Sephadex-200葡聚糖凝胶柱层析纯化得到纯化红枣多糖（ZJP-1-1）。经浓硫酸法制备硫酸化红枣多糖（S-ZJP-1-1）,探究ZJP-1-1和S-ZJP-1-1的结构和生物活性,结果如下:1、红枣多糖的分离纯化及其结构表征以购买的红枣粗多糖（ZJP）为主
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为进一步研究纯化红枣多糖及硫酸化修饰产物的结构与生物活性之间的关系,本文采用红枣粗多糖（ZJP）为实验原料,DEAE-52离子交换色谱及Sephadex-200葡聚糖凝胶柱层析纯化得到纯化红枣多糖（ZJP-1-1）。经浓硫酸法制备硫酸化红枣多糖（S-ZJP-1-1）,探究ZJP-1-1和S-ZJP-1-1的结构和生物活性,结果如下:1、红枣多糖的分离纯化及其结构表征以购买的红枣粗多糖（ZJP）为主要原料,筛选出活性炭吸附脱色法、H2O2脱色法和两种大孔树脂（AB-8和D101）脱色法对ZJP脱色的最佳方法,以及用Svage试剂脱蛋白最佳脱蛋白的次数。实验结果表明:使用Sevag法脱蛋白6次对ZJP脱蛋白效果最好,且多糖保留率相对较高,脱蛋白率为74.53%,保留率为70.87%。脱色方法中大孔树脂AB-8的脱色效果最好,且多糖保留率较高,其脱色率为83.1%,多糖保留率为72.81%。初步处理的红枣多糖经过DEAE-52柱层析,得到四种主要组分ZJP-1、ZJP-2、ZJP-3和ZJP-4,通过对4种组分多糖抗氧化活性的测定,选用4种组分中抗氧化活性最高的ZJP-1进行Sephadex G-200柱层析,得到纯化红枣多糖ZJP-1-1。经过理化指标的测定:纯化红枣多糖ZJP-1-1是淡黄色固体粉末,不含有淀粉、蛋白、核酸和多酚类等物质。经结构表征的测定:纯化红枣多糖ZJP-1-1是分子量（Mw）为4.937×104 Da的杂多糖,由葡萄糖（Glc）、阿拉伯糖（Ara）、半乳糖组成（Gla）,其摩尔比是99.328:0.449:0.411,ZJP-1-1是以α-吡喃糖为主构成的不具有三股螺旋结构的多糖,具有很多分支,主链存在1→6、少量1→3、1→2和1→4连接的糖苷键,在扫描电镜下为不规则片状形态,并且具有一定的热稳定性。2、红枣多糖的硫酸化修饰及其结构表征采用浓硫酸法对红枣多糖进行硫酸化修饰,通过单因素试验得到的最佳条件为:酯化试剂（浓硫酸:正丁醇）的比例为3:1,反应时间为0.5 h,反应温度为0℃时,硫酸化红枣多糖的取代度最高。根据最佳反应条件得到红枣多糖硫酸化衍生物S-ZJP-1-1。S-ZJP-1-1是Mw为2.482×105Da的杂多糖,由葡萄糖（Glc）、阿拉伯糖（Ara）、半乳糖（Gla）组成,摩尔比为74.046:0.232:0.288,其中FT-IR分析S-ZJP-1-1除了具多糖吸收峰,还具硫酸基团的特征吸收峰,说明红枣多糖的硫酸化修饰成功进行。核磁共振光谱、高碘酸氧化、刚果红试验等表明S-ZJP-1-1具有与ZJP-1-1相同的主链结构,不具有三螺旋结构,表面为相对光滑的不规则片状形态,热稳定性相对提高。3、红枣多糖的生物活性分析经过对ZJP-1-1和S-ZJP-1-1的抗氧化活性的测定,结果显示均具有较好的抗氧化性。当样品浓度是0.5mg/m L时,ZJP-1-1和S-ZJP-1-1的DPPH自由基清除活性分别为40.4%和47.6%,ATBS自由基清除活性分别为42.02%和43.53%,·OH的清除率达到43.02%和46.53%,超氧阴离子自由基清除活性为39.55%和42.77%,还原力为0.419和0.531,Fe2+螯合活性为39.55%和44.77%。对ZJP-1-1和S-ZJP-1-1进行糖苷酶抑制活性的测定,结果显示均具有较好的糖苷酶抑制能力。当多糖浓度在0.5mg/m L时,ZJP-1-1对α-葡萄糖苷酶的抑制率为71.34%,对α-淀粉酶的抑制率为81.47%,S-ZJP-1-1对α-葡萄糖苷酶的抑制率为78.12%,对α-淀粉酶的抑制率为84.34%。综上,硫酸化红枣多糖S-ZJP-1-1较纯化多糖ZJP-1-1的体外抗氧化能力更强,且糖苷酶抑制能力也更高。
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