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目的近期研究表明,血清酸性鞘磷脂酶(ASMase)在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发生发展中起着至关重要的作用。本研究通过测定NAFLD患者血清ASMase的表达,分析ASMase与NAFLD脂肪变程度及相关性纤维化的关系,初步揭示ASMase参与NAFLD发生发展的可能机制,并初步探讨ASMase作为诊断NAFLD、预测NAFLD脂肪变程度及相关性纤维化的生物学标志物的可能性及价值。方法本研究为病例对照研究,经过西安医学院第一附属医院伦理委员会批准实施。研究对象为2017年6月至2017年10月就诊于西安医学院第一附属医院并诊断为NAFLD的患者及健康体检者,所有研究对象均被告知研究目的、并签署书面知情同意书。共纳入120名研究对象,病例组NAFLD患者90例,男性55例,女性35例,年龄21岁-69岁,平均42.5±12.9岁;对照组健康体检者30例,男性14例,女性16例,年龄21岁-78岁,平均年龄47.3±11.0岁。参照2010年中华医学会肝脏病学分会NAFLD的诊断标准,通过腹部二维实时超声诊断NAFLD及其脂肪变程度。NAFLD相关性纤维化的评估使用FibroScan及FIB-4指数。收集所有研究对象的人体学指标,采集清晨空腹外周静脉血、离心,分别用于测定相关血液学及血清学指标(全自动血细胞分析仪分析,全自动生化分析仪分析),即白细胞(White Blood Cell,WBC)、血小板(Platelet,PLT)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、谷氨酰转肽酶(Glutamyl Transpeptidase,GGT)、尿酸(Uric Acid,UA)、肌酐(Creatinine,CREA)、尿素氮(Urea Nitrogen,UREA)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Cholesterol,CHOL)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein,HDLC)、空腹血糖(Fasting Plasma Glucose,FPG)、游离脂肪酸(Free Fatty Acids,FFA)、糖化血红蛋白(Glycated Hemoglobin,HbA1c)、白蛋白(Albumin,ALB)、空腹胰岛素(Fasting Insulin,FINS),ASMase水平(ELISA法)。计算稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(Homeostatic Model Assessment-Insulin Resistance Index,HOMA-IR)及FIB-4指数。所有数据使用SPSS18.0软件进行分析。所有变量均以均数±标准差(mean±SD)表示。Kolmogorov-Smirnov检验用于评估连续变量是否呈正态分布。使用t检验或者Mann-Whitney U检验比较连续变量组间差异。针对分类变量或者计数变量,使用卡方检验比较差异。多样本比较使用单因素方差分析。Pearson检验或者Spearman检验进行相关分析。对ASMase的诊断效应使用受试者工作特征曲线(Receiver operation Characteristic curve,ROC)进行评估。以P<0.05表示有统计学意义。图表使用Excel 2003、Graphpad Prism 6.0及Medcalc软件制作。结果1.NAFLD患者血清ASMase水平(25.8±3.5 nmol/L)较对照组(22.6±2.2 nmol/L)明显升高(P<0.01)。根据超声检查结果对病例组分亚组后,三组比较显示差异有统计学意义(P<0.01)。随后组间比较(对照组与轻度NAFLD组,对照组与中重度NAFLD组,轻度NAFLD组与中重度NAFLD组),结果显示差异均有统计学意义(P<0.01)。提示ASMase水平与NAFLD脂肪变程度有关,且随着脂肪变程度加重,血清ASMase水平逐渐升高。2.ASMase与HOMA-IR(r=0.210,P<0.05)、AST(r=0.247,P<0.05)、BMI(r=0.252,P<0.05)、LSM(r=0.276,P<0.01)、HbA1c(r=0.230,P<0.05)呈正相关,与WBC(r=-0.304,P<0.01)、CHOL(r=-0.234,P<0.05)、LDL-C(r=-0.211,P<0.05)呈负相关。3.NAFLD相关性纤维化的评估基于FibroScan测定的肝脏硬度值(Liver Stiffness Measurement,LSM)、FIB-4指数,将病例组分为三亚组,比较后显示差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),提示ASMase与NAFLD相关性纤维化有关,且随纤维化的进展而升高。4.对于诊断NAFLD,ASMase的曲线下面积(AUC)=0.771(P<0.01),提示ASMase作为独立标志物对NAFLD的诊断有一定的准确性。对于诊断NAFLD相关性纤维化(LSM诊断),以F2分组AUC=0.701(P<0.01),以F3分组AUC=0.858(P<0.01),提示ASMase作为独立标志物对NAFLD相关性纤维化(F3以上)有一定的诊断效能。结论1.NAFLD患者血清ASMase水平较对照组显著升高,表达上调,且与HOMR-IR相关,提示ASMase与胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)相关,随IR的加重而升高;ASMase可能通过胰岛素信号途径上调IR,从而影响肝细胞的脂质代谢,导致肝脏脂肪变及炎症、纤维化的发生。2.ASMase与NAFLD脂肪变程度及相关性纤维化有关,且随脂肪变及纤维化的进展而升高,提示ASMase参与NAFLD脂肪变以及纤维化的发展。3.ASMase可能是NAFLD发病机制中的重要参与因子,ROC曲线分析提示ASMase可作为独立标志物对NAFLD进行诊断。对NAFLD相关性纤维化改变的评估,特别是F3以上具有一定的诊断效应,然因本实验样本数较少,可能需要进一步基础研究及大样本临床研究加以验证,或联合其他指标共同诊断。