温室大棚在连续多年采用噻唑膦等有机磷类杀线虫剂防治根结线虫(Meloidogyne incognita)后,使根结线虫在一定程度上对噻唑膦产生了抗药性。本研究通过RT-PCR技术、酶活性测定、体外RNAi介导的功能鉴定等方法,明确了南方根结线虫对噻唑膦的抗性水平及抗性种群乙酰胆碱酯酶基因对噻膦抗药性的作用,揭示了南方根结线虫对有机磷类杀线虫剂产生抗药性的机理,并对抗性治理策略进行了初步探究。酶活性测定和考马斯亮蓝染色法进行抗性和敏感种群蛋白含量和AChE比活力的测定和比较,发现敏感种群AChE比活力显著高于抗性种群;抗性和敏感种群AChE对噻唑膦的敏感性测定结果显示,抗性种群较敏感种群对噻唑膦更不敏感;利用RT-PCR技术扩增了南方根结线虫抗性和敏感种群AChE基因Mi-ace-1(登录号KU366258)和Mi-ace-2(登录号KU366259),同时在抗性种群中扩增到了与Mi-ace-2基因序列不同的差异序列Mi-ace-2a(KU360593),序列比对发现Mi-ace-2和Mi-ace-2a核苷酸序列的差异有68处,氨基酸序列的差异有18处;利用体外RNAi技术沉默抗性种群Mi-ace-2基因,沉默后抗性种群对噻唑膦的敏感性以及线虫总AChE对噻唑膦的敏感性提高,推测Mi-ace-2在南方根结线虫抗药性方面起着重要作用。抗性治理策略探究主要围绕生物防治及农业防治两个方面。生物防治测试了总状共头霉、淡紫拟青霉和蜡状芽孢杆菌三种生防微生物及其两两组合对南方根结线虫卵孵化的抑制、幼虫毒力以及盆栽和温室小区试验对南方根结线虫的防治效果,结果表明:三种生防微生物都有抑制卵孵化和杀线活性,抑制卵孵化效果最好的是50%总状共头霉和50%淡紫拟青霉,杀线活性最高的是50%总状共头霉,总状共头霉和淡紫拟青霉联合施用显著促进了黄瓜根长、茎长和植株重量,显著减少了线虫和根结数量,降低了线虫危害,增加了黄瓜产量,是保护性农田系统中防治植物寄生线虫的新的生物防治措施。农业防治对浅耕、深耕、浅耕+棉隆、深耕+棉隆4种土壤连作障碍处理耕作机械化技术防治南方根结线虫的效果及对土壤微量元素的影响进行了评价,试验结果表明:4种处理均能显著降低土壤中南方根结线虫的数量,提高对根结线虫的防治效果,增加西瓜的产量,其中,以深耕+棉隆处理的防治效果和增产效果最好,同时还增加了交换性镁和有效硒的含量。综合评价认为深耕+棉隆处理适于在南方根结线虫发生非常严重的地区推广应用,而对于根结线虫发生特别轻的地区,仅以浅耕处理就能有效控制其危害。综上所述,本研究初步明确了南方根结线虫Mi-ace-2在对噻唑膦抗药性方面发挥着重要作用,为探索南方根结线虫对有机磷类杀线虫剂的抗药性机理奠定了良好的基础。利用生物防治与农业防治措施可以有效防治根结线虫,对于延缓根结线虫的抗药性,减少化学农药用量,保护农业生态环境安全等具有重要意义。