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研究背景:输血相关急性肺损伤(Transfusion-related acute lung injury,TRALI)是与输血相关死亡的主要原因,目前TRALI的病理生理学机制尚未完全阐明,临床采取的措施主要是支持性治疗,尚无针对TRALI的特异性疗法。目前国内外研究的干预治疗措施主要是针对中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞和降低炎症等方面。然而内皮细胞的活化在输血相关急性肺损伤的发生发展中也起着至关重要的作用,目前尚未报道在TRALI中针对内皮细胞的干预治疗措施,故本课题欲以内皮细胞为干预治疗靶点进行研究。目的:本研究通过采用“二次打击”的抗体介导型TRALI小鼠模型和体外培养人肺微血管内皮细胞(Human microvascularendothelial cells,HMVECs),探讨白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)对TRALI小鼠内皮细胞的干预治疗,为TRALI的预防性干预和发生发展机制的深入研究提供新的见解。方法:1.体内动物实验:采用“二次打击”(LPS+MHC-I mAb)模型,选取8-10周龄BALB/c雄性小鼠32只,随机分为4组(每组8只):正常对照组、LPS对照组、TRALI组和rIL-35干预组。TRALI组小鼠予以腹腔注射低剂量的LPS(0.1 mg/kg),24h后尾静脉注射MHC-I mAb(2mg/kg)造模;rIL-35干预组小鼠于建模前两天每天一次尾静脉注射rIL-35(100μg/kg),第三天开始建模,于抗体注射前予以第三次干预;正常对照组不予以处理;LPS对照组予以同等剂量的LPS。于小鼠死亡或观察至2h后取材,检测肺组织湿干重比(W/D)、肺组织病理切片(HE染色)分析;收集肺组织匀浆的上清液用于肺部总蛋白浓度、髓过氧化物酶(MPO)活性以及细胞因子IL-6、IFN-γ、TNF水平和E选择素、P选择素、ICAM-1水平的检测;收集血液用于血液中E选择素、P选择素和ICAM-1水平的检测。2.HMVECs细胞实验:体外培养人肺微血管内皮细胞(HMVECs),在细胞生长至90%-95%时,将其分为三组:正常对照组、LPS干预组、rIL-35干预组。LPS干预组:LPS(0.5μg/mL)刺激6h,使得HMVECs充分活化;rIL-35干预组:rIL-35(2μg/mL)预处理18h后LPS(0.5μg/mL)刺激6h;正常对照组不做处理。流式细胞仪检测E选择素、P选择素和ICAM-1的表达水平。结果:1.动物实验:与对照组相比,TRALI组小鼠肺组织病理切片中显示有大量炎性细胞的浸润、肺泡结构破坏、肺泡腔内渗出物明显增多以及弥漫性的出血,提示建模成功。与TRALI组相比,rIL-35干预组小鼠肺组织病理切片显示肺泡腔内红细胞和炎性细胞的减少,肺水肿显著减轻,肺W/D降低(4.158±0.257 vs 5.987±0.745,P<0.05);肺组织匀浆上清液中蛋白水平(1787.50±363.89 vs 2449.98±372.34,P<0.05)和 MPO 活性(208.70±48.82 vs 528.58±95.38,P<0.05)减低,细胞因子 IL-6(11.84±3.37vs294.80±105.31,P<0.05)、IFN-γ(4.74±0.60 vs 6.88±1.57,P<0.05)和 TNF(9.70±2.94vs 14.76±1.97,P<0.05)水平降低,抑制了中性粒细胞在肺内的聚集;肺组织匀浆上清液中E选择素(21.66±1.42 vs 24.40±3.27)、P 选择素(29.61±3.62vs 34.02±2.38)及 ICAM-1(54.16±6.32vs 62.72±5.51)表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);血液中E选择素(18.52±3.63 vs 22.66±3.17)、P选择素(21.14±3.43vs 25.64±3.04)和ICAM-1(52.85±7.70 vs 62.72±5.51)表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)且2h生存率由37.5%升高至100%。2.HMVECs细胞实验:与LPS干预组相比,rIL-35干预组E选择素(1.24±0.45 vs3.23±0.45)、P 选择素(0.15±0.04vs0.29±0.06)和 ICAM-1(52.92±0.42vs 59.37±1.81)表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:TRALI的发生机制与内皮细胞的活化相关,rIL-35可通过抑制内皮细胞的活化防止TRALI的发生发展,为TRALI的预防性干预和发生发展机制的深入研究提供新的见解。