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球囊扩张或支架植入现已成为治疗小儿先天性血管狭窄性疾病的主要手段，即使采用药物涂层支架后术后3-6月内再狭窄（Restenosis，RS）的发生率依然达到10%-15%[1]。再狭窄的发生是诸多因素参与的复杂过程，包括内皮功能受损，炎症反应，血栓形成，平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells，VSMC）表型转换、增殖迁移，细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）分泌聚集，血管重塑一系列病理改变。研究证实，单一抗VSMC增殖或抗血栓形成，无法消除内皮损伤后的内膜增生,综合治疗在再狭窄防治中渐渐得到重视。近年来研究发现，中药川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）具有抑制平滑肌细胞增殖，降低血小板粘附、聚集，防止血栓形成，保护血管内皮细胞等作用，在再狭窄防治综合治疗方面渐渐体现出独特的优势。本实验在前期研究基础上，研究超声微泡介导TMP对兔髂动脉内皮损伤后血管结构重建的干预作用及对血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响，初步探讨超声微泡介导TMP靶向释药防治再狭窄的有效性及可能的作用机制。目的：利用不同直径球囊扩张损伤内皮建立低龄兔腹主动脉狭窄模型，超声与病理结合评价血管狭窄程度和内膜增生，探讨球囊直径对未成年兔动脉内皮损伤后内膜增生的影响；采用优化球囊建立髂动脉内膜增生模型，静脉注射自制TMP脂质微泡（Tramethylpyrazine combiningLiposome Microbubbles，TLM）混悬液联合低频超声对损伤段血管进行干预，研究超声微泡介导川芎嗪靶向释药对血管结构重建的干预作用，通过对比不同时间段和不同干预方式的治疗效果，初步探讨TMP防治再狭窄的有效性及可能作用机制。方法：①川芎嗪纳米脂质微泡的制备和性能检测：采用薄膜分散法及机械振荡法制备人血白蛋白改良脂质微泡,光学显微镜下观察其形态、进行浓度记数；Malvern激光测量仪检测其粒径大小、分布和zata电位。②兔动脉球囊损伤后血管再狭窄模型的建立：新西兰大白兔25只，日龄(80±5)天，随机分为建模组和空白组，建模组分别采用直径2.5mm、3.0mm、3.5mm、4.0mm球囊扩张术损伤腹主动脉内皮，空白组不做任何处理，分别于术后1、2、4周采用高频血管超声测量腹主动脉管腔内径，及相应的血流动力学变化，HE染色和Masson染色测量术后管腔面积，内、中膜面积变化情况，与各观察点超声检测结果做对比分析。③超声微泡介导川芎嗪不同时间给药对兔动脉球囊损伤后血管结构重建的干预效果研究：新西兰大白兔单侧髂动脉狭窄模型25只，日龄（90±10）天，随机平均分为5组，A组：空白组，B组：模型组，C组：超声微泡介导川芎嗪术后即刻给药，D组：超声微泡介导川芎嗪术后1周给药，E组：超声微泡介导川芎嗪术后3周给药。各组连续干预7天，术后4周取损伤处血管，HE染色及弹力纤维染色计算血管管腔面积、内膜面积及中膜面积、内中膜面积比和狭窄率。④超声微泡介导川芎嗪不同干预方式对兔动脉球囊损伤后血管结构重建的干预效果研究：新西兰大白兔25只，日龄(90±10)天，随机平均分为5组，A：模型组（Model组）；B：川芎嗪组（TMP组）；C：川芎嗪联合靶向微泡破裂组（TMP+LM+US组）；D：低频超声辐照组（US组）；E：空白微泡联合低频超声辐照组（LM+US组）。各实验组术后即刻开始干预，连续7天，术后4周处死实验动物，病理观察其管腔面积及内中膜面积比变化情况，免疫组化检测血管内膜VEGF表达改变。结果①自制川芎嗪脂质微泡，形态好，粒径分布均匀，理化性质稳定。光镜观察其分布均匀，呈圆球状,平均粒径为（516.5±12.6）nm，平均浓度为8.03109/ml,表面电位为(-2.6±0.4)mv。②2.5mm球囊组、3.0mm球囊组、3.5mm球囊组术后28天超声测量直径狭窄率高于正常对照组和4.0mm球囊组（P＜0.05）。各建模组术后4周新生内膜面积和内膜增生指数较正常对照组增加（P＜0.01），2.5mm球囊组、3.0mm球囊组、3.5mm球囊组球囊血管直径比例与新生内膜面积（r2=0.781，P=0.000）和内膜增生指数（r2=0.784，P=0.000）显著正相关，4.0mm球囊组虽然球囊血管直径比例最高，但新生内膜面积和内膜增生指数低于3.5mm球囊组（P＜0.05）。③与空白组相比，其余各组新生内膜面积和内中膜面积比均增加显著（P＜0.01），模型组增加最明显（P＜0.05），而中膜面积差异不大（P＞0.05）。相比模型组组，术后即刻给药组、术后1周给药组新生内膜面积和内中膜面积比均显著减少（P＜0.05或P＜0.01），术后1周给药组内新生膜面积和内中膜面积比下降最明显，内中膜面积比较模型组组下降0.99；相比模型组组，术后3周给药组组新生内膜面积变化不大，内中膜面积比减少（P＜0.05）。④模型组髂外动脉新生内膜面积大于髂总动脉（P=0.034），而内中膜面积比二者差异不大（P=0.134）。与模型组相比，TMP组、TMP+LM+US组、LM+US组和US组髂外动脉新生内膜面积和内中膜面积比均显著小于模型组（P＜0.01或P＜0.05），TMP+LM+US组减少最为显著，髂外动脉内中膜面积比较模型组下降0.996（t=4.854，P=0.008）。免疫组织化学分析，与模型组相比，TMP组、TMP+LM+US组髂外动脉内膜VEGF表达量降低（P＜0.01），TMP+LM+US组降低最多，US组和LM+US组VEGF表达量变化不大（P＞0.05）；与TMP组相比，TMP+LM+US组VEGF表达量降低明显（P＜0.05）。结论：本研究结果证实：利用球囊内皮剥脱法可成功建立未成年兔动脉再狭窄模型，球囊血管直径比值1.2-1.8范围内，伴随球囊直径增大，内膜增生程度加重。高频血管超声可以动态评价血管再狭窄模型,与病理结果对比有良好的一致性。超声微泡介导川芎嗪术后即刻给药可降低给药剂量同时有效减轻损伤内、中膜的病理性增生，下调内膜VEGF表达，在防治介入术后血管再狭窄发生方面前景广阔。