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目的通过建立去势兔干眼模型,观察密蒙花滴眼液对其泪腺细胞凋亡相关因子PI3K、Akt、Caspase-9的干预作用。方法将36只新西兰白兔随机分为A、B、C、D、E、F六组,每组6只,分别为:A组:空白对照组、B组:模型组、C组:1mg/ml密蒙花滴眼液、D组:1.5mg/ml密蒙花滴眼液、E组:3mg/ml密蒙花滴眼液、F组:阳性对照组。A、B组不予处理,C、D、E组分别予以密蒙花滴眼液1mg/ml、1.5mg/ml、3mg/ml局部滴眼,3 次/日;F 组予以 2mg/kg 丙酸睾酮注射液在兔大腿肌肉处注射,3 日/次。造模2月后,检测SIT证实去势兔干眼模型成模,然后开始给药,连续用药4周。实验过程中,D、F组各死亡1只实验动物。实验结束取泪腺组织送检,光镜下观察各组泪腺形态学改变,免疫组化检测各组泪腺组织中PI3K、Akt、Caspase-9的表达情况,qPCR法及Western Blot法检测各组泪腺组织中PI3K、Akt、Caspase-9 mRNA及其蛋白的相对表达情况。结果1.HE染色:模型组泪腺组织结构欠清晰,腺泡及泪腺上皮大小不一、排列紊乱,可见大量腺泡萎缩融合,有大量空泡形成;3mg/ml密蒙花滴眼液组泪腺结构清晰,腺泡及泪腺上皮大小均匀、排列整齐,形态正常,可见少许空泡,与阳性对照组类似,不及空白对照组。2.免疫组化法:(1)3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织Caspase-9蛋白平均灰度值较模型组高(P<0.01),与阳性对照组、空白组相似(P>0.05);Caspase-9蛋白平均光密度值较模型组低(P<0.01),与阳性对照组、空白组相似(P>0.05);(2)3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织PI3K蛋白平均灰度值较模型组低(P<0.01),与阳性对照组、空白组相似(P>0.05);PI3K蛋白平均光密度值较模型组高(P<0.01),但均不及阳性对照组、空白对照组(P<0.05),相较而言,1mg/ml、1.5mg/ml密蒙花滴眼液组平均光密度值与阳性对照组、空白对照组相似(P>0.05);(3)3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织Akt蛋白平均灰度值较模型组低(P<0.01),与阳性对照组、空白组相似(P>0.05);Akt蛋白平均光密度值较模型组高(P<0.01),与阳性对照组、空白组相似(P>0.05)。3.qPCR法:3mg/ml密蒙花滴眼液滴眼4周后泪腺组织Caspase-9 mRNA相对表达量较模型组低(P<0.01),与空白对照组相似(P>0.05);3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织PI3K mRNA相对表达量较模型组高(P<0.01),与阳性对照组相似(P>0.05),但不及空白对照组;3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织Akt mRNA相对表达量较模型组高(P<0.01),与阳性对照组、空白对照组相似(P>0.05)。4.Western Blot法:1mg/ml、1.5mg/ml、3mg/ml 密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织Caspase-9蛋白相对表达量较模型组低(P<0.01),与阳性对照组和空白对照组相似(P>0.05);3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织PI3K蛋白相对表达量较模型组高(P<0.01),与阳性对照组和空白对照组相似(P>0.05);1mg/ml、1.5mg/ml、3mg/ml密蒙花滴眼液组滴眼4周后泪腺组织Akt蛋白相对表达量较模型组高(P<0.01),与阳性对照组和空白对照组相似(P>0.05)。结论1.密蒙花滴眼液能改善去势兔干眼模型泪腺的形态结构;2.3mg/ml密蒙花滴眼液可下调促凋亡蛋白Caspase-9及其mRNA的表达,上调抗凋亡蛋白PI3K、Akt及其mRNA的表达;3.1.5mg/ml密蒙花滴眼液可在一定程度上下调促凋亡蛋白Caspase-9的表达,也可以一定程度上调抗凋亡蛋白PI3K、Ak,但对凋亡相关蛋白mRNA的作用不太明显。