本研究对TGEV SBC蛋白(在PRCV中缺失)和TGEVN蛋白(TGEV与PRCV共有)进行了原核表达,建立了以重组SBC和N蛋白为抗原的检测TGEV与PRCV抗体的间接ELISA方法。主要研究内容如下：1.TGEV重组SBC和N蛋白的表达与纯化将构建保存的重组表达菌pET32a-SBC BL21(DE3)和pET32a-N BL21(DE3)进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳分析,诱导的pET32a-SBC和pET32a-N分别获得了38kDa和67kDa大小的浓缩蛋白带。对重组SBC和N蛋白进行纯化。蛋白质免疫印迹结果显示,重组的TGEV SBC和N蛋白与抗TGEV的猪血清发生特异性反应,表明其具有抗原活性。2. TGEV重组SBC和N蛋白作为包被抗原,建立检测TGEV与PRCV抗体的间接ELISA方法分别以TGEV重组SBC和N蛋白作为包被抗原筛选确定了间接ELISA检测TGEV与PRCV抗体的最佳反应条件：重组SBC和N蛋白最佳抗原包被浓度分别为1.4μg／ml(稀释160倍)和1.1μg／ml(稀释320倍)；血清的稀释度分别为320和640倍；PBST稀释液中蛋白稳定剂为5%小牛血清；封闭液分别为2%脱脂牛奶和5%小牛血清,于37℃封闭90min；酶标二抗反应条件分别为4800倍和9600倍稀释,37℃孵育30min；SBC和N蛋白包被孔的阳性临界值分别为0.1417和0.1958。特异性结果显示,SBC和N蛋白包被孔与猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌病、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪呼吸与繁殖障碍综合症病毒的阳性血清、PBS均不发生交叉反应。SBC蛋白包被孔不与PRCV阳性血清发生交叉反应,而N蛋白包被孔与PRCV阳性血清发生交叉反应。ELISA的重复性结果显示：SBC蛋白包被孔的批内与批间检测结果的变异系数低于10%,而N蛋白包被孔的批内与批间平均变异系数分别低于10%及11%。3.TGEV与PRCV抗体间接ELISA检测方法的应用用建立的鉴别诊断间接ELISA方法对采集自四川28个猪场的548份血清进行了检测,结果显示：有253份血清为TGEV阳性血清,有7份为PRCV阳性血清。用血清中和试验对其中100份血清做检测对照,间接ELISA中的SBC蛋白包被孔、N蛋白包被孔检测结果相对于血清中和试验的符合率分别为84.0%和86.0%。