【摘 要】
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目的：建立荧光定量PCR检测牛乳中产肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法。
方法：以金黄色葡萄球菌耐热肠毒素A保守序列为目标,根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌SEA基因序列
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目的：建立荧光定量PCR检测牛乳中产肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法。
方法：以金黄色葡萄球菌耐热肠毒素A保守序列为目标,根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌SEA基因序列,设计了2对引物。在对临床分离的金黄色葡萄球菌基因组DNA测序正确后,在鉴定其特异性及灵敏度的基础上建立了检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的荧光定量PCR检测方法。
结果：成功克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因保守区序列。全序列由774个碱基构成,克隆序列与Genbank公布参比序列相似性达到了99％。荧光定量检测引物的特异性良好,标准曲线符合要求,灵敏度水平也达到49.5fg。对人工污染的牛乳中含SEA的金黄色葡萄球菌的检测结果显示,检出细菌检测限为200CFU/mL。
结论：成功克隆牛源金黄色葡萄球菌SEA序列,并建立了快速捡测牛乳中含SEA的金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR方法,为快速检测牛原料乳中含有肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌提供了有效的技术支撑。
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