二氢杨梅素的抑菌作用研究

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二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY),也称为蛇葡萄素、蛇树皮素、双氢杨梅素、双氢杨梅树皮素、福建茶素等,属黄酮类化合物。本文研究了二氢杨梅素的抑菌作用及其影响因素。本文采用90%乙醇进行显齿蛇葡萄芽头干叶中二氢杨梅素的提取,经正交试验优化后最佳工艺为:料液比1:12、提取温度70℃,提取时间90min。。依照优化条件进行验证试验,获得二氢杨梅素得率为18.51%;将二氢杨梅素粗提物溶于丙酮进行多次分离纯化,5次重结晶后二氢杨梅素纯度达94.5%。本文利用纸片扩散法和稀释法这两种常用的检测方法,分别测定了二氢杨梅素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、肺炎克雷伯菌、福氏志贺菌、奇异变形杆菌和乙型副伤寒沙门氏菌的抑菌活性及其最低抑菌浓度(MIC)。二氢杨梅素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌、乙型副伤寒沙门氏菌、福氏志贺菌、铜绿假单孢菌等细菌均有较为明显的抑菌作用,且抑菌效果随着二氢杨梅素的浓度增加而增强。二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌的MIC为0.06mg/mL,对福氏志贺菌、奇异变形杆菌和铜绿假单孢菌的MIC为0.12mg/mL,对大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和肺炎克雷伯菌的MIC为0.24mg/mL,而对枯草芽孢杆菌的MIC为0.95mg/mL。这表明二氢杨梅素具有广谱抑菌、杀菌的效果,且其最低抑菌浓度较低。在对二氢杨梅素抑菌作用影响因素的研究中发现:pH对二氢杨梅素抑菌活性的影响显著,在不同的pH环境下,二氢杨梅素对不同测试菌的抑菌活性有差异,但归纳而言,其在中性和酸性环境中抑菌活性较强。二氢杨梅素随加热时间和温度的增加会变得很不稳定,容易发生氧化而降低抑菌效果。Na+和Ca2+的存在对二氢杨梅素的抑菌活性均有减弱作用,且减弱程度与Na+和Ca2+的浓度呈正相关,其中以Ca2+对二氢杨梅素抑菌活性减弱的影响较为明显。因此,为保证二氢杨梅素的最佳功效,在提取、加工及保藏过程中应避免高温或暴露于含Na+、Ca2+等离子的环境,最适pH为酸性及中性(pH <7.0)。本研究结果表明:随着常用食品防腐剂(山梨酸钾和苯甲酸钠)和常用食品抗氧化剂(TBHQ和BHT)的用量分别增加,二氢杨梅素的抑菌活性均有所增强,但与常用食品防腐剂和常用食品抗氧化剂复配时,抑菌效果有差异:当山梨酸钾与苯甲酸钠的质量比为1:1时,联合添加对二氢杨梅素抑菌活性的增强作用不如单独添加的效果,而TBHQ和BHT联合添加时(TBHQ与BHT的质量比为1:1)对二氢杨梅素抑菌活性的增强作用与其单独添加时无明显差异。本论文的研究为二氢杨梅素作为中药制剂应用于临床上常见病原性疾病的防治和天然食品添加剂应用于食品加工行业,以及保证二氢杨梅素的功效应注意的事项提供了参考。
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