刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）简称弓形虫,可感染包括人类在内的所有温血动物,呈世界性分布,是一种重要的人畜共患寄生虫。弓形虫是典型的机会性致病寄生虫,当其感染健康的宿主时并不表现明显的临床症状;但当其感染免疫功能缺陷的宿主时,会引发严重的弓形虫病,甚至导致死亡。此外,孕妇感染弓形虫后会造成流产和死胎,还可导致发育中的胎儿患上先天性弓形虫病。弓形虫流行病学调查发现,我国人群的平均感染率为10%。家畜感染弓形虫后主要表现为流产,死胎,木乃伊胎等,以及肉制品和奶制品质量下降弓形虫给养殖业和人类公共卫生带来了巨大的经济损失与潜在威胁。弓形虫的入侵过程复杂,了解弓形虫入侵宿主的过程有助于防治弓形虫病及其研究可靠的疫苗。弓形虫表面蛋白在弓形虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用,本文对一种表面抗原蛋白SRS29C进行了研究。（1）通过大肠杆菌原核表达系统构建了pGEX-4T-1-SRS29C重组质粒,并转化进Transetta和BL21两种表达感受态中,均成功表达出了SRS29C-GST重组蛋白,由于蛋白表达形式为不可溶性包涵体的形式,所以利用包涵体洗涤的方式将所获蛋白进行纯化,经包涵体洗涤后的重组蛋白纯度符合试验需求,随后利用其免疫了新西兰大白兔,制备兔源SRS29C融合蛋白的多克隆抗体,经ELISA及Western-blot检验其性能,所获多克隆抗效价最高在1:320 000且免疫原性良好,并利用所制备的抗体与已报道的表达在弓形虫表面的SAG1抗体进行了IFA试验,结果显示SRS29C在弓形虫表面表达。（2）利用点突变技术及无缝克隆技术,构建CRISPR/Cas9技术所需的SRS29C基因敲除导向质粒,同源模板质粒,定点回补导向质粒及定点回补过表达质粒,经测序均满足试验需求;经电转化构建弓形虫SRS29C基因敲除虫株,利用设计的基因敲除特异性检测引物进行PCR验证,筛选出阳性的SRS29C基因敲除株,同时利用制备的多克隆抗体,对基因敲除株进行Western-blot检测器是否表达SRS29C蛋白,经PCR鉴定能扩增出797bp的5’UTR（SRS29C）片段及576bp的3’UTR（SRS29C）片段,且未扩增出SRS29C基因片段,而在对照组中扩增出了700bp的SRS29C片段,同时蛋白验证基因敲除株中未能表达SRS29C蛋白;说明成功构建并筛选出SRS29C基因敲除单克隆虫株,为弓形虫SRS29C基因的功能研究奠定了基础。