携人血栓调节蛋白基因内皮祖细胞预防动脉成形术后再狭窄

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目的 探讨携人血栓调节蛋白(human thrombomodulin, hTM)基因的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)局部移植预防动脉成形术后再狭窄的可行性。方法 应用密度梯度离心法分离兔外周血EPCs;慢病毒载体plenti6.3-hTM-IRES-EGFP感染EPCs,并以超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记;利用双腔Fogarty球囊制作兔右侧颈总动脉损伤模型共36只(随机平均分为三组),利用Fogarty球囊阻断损伤段近心端血流后、分别将hTM-EPCs、单纯EPCs或等量生理盐水定向移植至血管损伤处;术后1周每组随机选取4只兔取损伤血管段行Western blot检测及普鲁士蓝染色,观察血管损伤处有无外源性EPCs定植:术后4、8周行MR扫描,评估血管腔狭窄程度;术后8周末取所有剩余兔损伤血管段行HE、弹力纤维及PCNA染色,观察损伤段血管壁结构、平滑肌及内膜增生程度。结果 术后1周,普鲁士蓝染色显示损伤处血管内膜有外源性含铁EPCs附着;Westernblot检测示hTM-EPCs组损伤血管段高表达血栓调节蛋白(thrombomodulin, TM)。MR显示hTM-EPCs组损伤血管段管腔狭窄程度低于单纯EPC s组及对照组。HE、弹力纤维及PCNA染色结果显示,术后8周,hTM-EPCs组、单纯EPCs组及对照组内膜/中膜比(N/M)分别为0.35±0.04、0.70±.06和1.30±0.05(P<0.05);管腔狭窄率分别为0.11±0.02、0.24±0.05和0.35±0.09 (P<0.05); PCNA阳性细胞指数分别为0.12±1:0.04、0.23±0.04和0.49±0.07(P<0.05)。结论 应用双腔Fogarty球囊构建兔颈总动脉损伤模型并阻断局部血流后,可使hTM基因修饰的EPCs定植于血管损伤段,并能有效抑制术后再狭窄。
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