奶牛乳房炎是奶牛的常见的高发病之一，因其病因多样复杂，难以防治，给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失同时因其病原菌为人畜共患致病菌，因而还危害到人类健康。利用疫苗来预防和控制奶牛乳房炎是一种安全、经济、有效的方法。本实验克隆奶牛乳房炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP2基因编码B细胞表位抗原优势序列并构建重组表达载体，转入大肠杆菌中表达，并对表达蛋白的抗原性进行鉴定，为研究其致病机制及菌毛抗原蛋白的抗原性研究提供实验基础。　　根据GenBank公布的牛源无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP2基因序列设计与合成引物，以牛乳腺炎无乳链球菌基因组DNA为模板，利用PCR技术获得AP2抗原表位序列基因片段，经克隆与序列分析正确后，将其亚克隆至原核表达载体pET-30(a)中，构建重组质粒pET-30a-AP2，将其转化至E.coli/BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE电泳，Bandscan软件分析表达蛋白图谱，利用Western-blot试验验证重组蛋白的反应原性。利用Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白，经弗氏佐剂乳化后免疫家兔，探索其免疫原性，并建立检测免疫抗体滴度的间接ELISA。以进一步证明实验结果的可靠性和科学性。　　经测序和酶切结果表明，成功克隆了奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP2编码的B细胞表位抗原序列，并成功构建了原核表达重组质粒，菌体裂解上清中可溶性蛋白含量达到54.3％，重组蛋白的相对分子质量为36ku，纯化蛋白含量达到1.68mg/mL。Western-blot结果表明，重组蛋白具有良好的反应原性，间接ELISA检测免疫抗体滴度结果表明，表达蛋白具有良好的免疫原性，三免后56d的免疫抗体滴度达到1∶10000，70 d之后依然保持较高抗体滴度。　　成功克隆牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP2抗原B细胞表位序列，序列含有699bp，编码233个氨基酸残基;构建的原核重组表达载体pET-30a-AP2在大肠杆菌中得到高效可溶性表达;PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP2抗原具有较好的抗原性，可以作为进一步研究的候选抗原;建立了检测免疫抗体的间接ELISA;可以作为进一步对其感染机制和免疫机制的靶标无多肽进行研究。