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Usher综合症会导致眼盲和耳聋,是视力和听力方面最常见的基因疾病。其中Ⅱ型(USH2)患者表现为先天性中重度的听力受损和正常的前庭反应,是发病最多的类型,也是备受关注的研究热点。Usher综合症Ⅱ型有三个已确认的相关蛋白:usherin、GPR98(G protein-couple receptor 98)以及whirlin,它们在体内会形成USH2蛋白复合体,当某个蛋白出现问题不能形成复合体就会导致USH2的发病。其中,usherin和GPR98蛋白的大部分在细胞膜外,C端均有一个PDZ结合结构域(PBM)。whirlin是一种支架蛋白,包含3个PDZ结构域和一个脯氨酸富集区(PR),whirlin在细胞内起到一个连接USH2蛋白复合体的作用,是构成USH2蛋白复合体的必要组成部分,所以与whirlin能相互作用的蛋白常被认为有可能是USH2蛋白复合体的成员。研究表明,espin与whirlin都分布于感觉细胞的微绒毛中,并且在体外可以相互作用,但是espin与whirlin相互作用的机制尚不清楚。本文构建了两个能够表达whirlin蛋白N端和C端的重组载体,其中N端片段包含前两个PDZ结构域和一个PR,C端片段包含最后一个PDZ结构域。我们将whirlin重组质粒和之前构建的espin重组质粒共转染到COS-7细胞中,通过不同的荧光观察whirlin和espin在细胞中的定位。将重组质粒共转染到HEK293T细胞中,两种蛋白质在细胞裂解液中免疫共沉淀,最后用Western Blot检测whirlin和espin之间是否有相互作用。实验发现,whirlin的N端片段与espin有共定位,并且能够将细胞裂解液中的espin共沉淀下来。在之前的研究中,whirlin曾被我们人为地分为大小相似的两个片段,其中N端片段包含前两个PDZ结构域,C端片段包含PR和最后一个PDZ结构域,而这两个片段均不能与espin相互作用。与之前的实验数据相比,whirlin和espin中包含的PR都对其相互作用有着重要的影响。虽然可能直接参与相互作用的是PDZ结构域,但是PR似乎对于whirlin和espin形成稳定的蛋白构象是必需的,是影响蛋白间相互作用的关键结构。本文为揭示USH2蛋白复合体形成的分子机制奠定了基础,并且为USH2提供了新的的治疗思路。