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目的:本研究建立大鼠心肌缺血再灌注模型,朱日很滴丸进行有效的干预,旨在阐明蒙药朱日很滴丸在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用及其分子机制,从而为蒙药朱日很滴丸治疗蒙医心刺痛提供客观依据。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(I/R)、阳性组(DS),朱日很滴丸低(ZRH-L)、中(ZRH-M)、高(ZRH-H)剂量组;各组连续灌胃给药15天,每天1次,Sham组、I/R组分别给予生理盐水(10ml·kg-1),DS组给予复方丹参滴丸(170mg·kg-1),ZRH-L、ZRH-M、ZRH-H组分别给予朱日很滴丸(300、900、1500mg·kg-1),各组均于造模前1h给药1次,采用结扎大鼠左冠前降支缺血30 min,再灌注2h,构建大鼠心肌缺血/再灌注模型,腹主动脉采血,摘心脏留标本。应用图像分析软件(mage-Pro Plus)计算心肌梗死面积,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(CTnT)含量和心肌丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力,HE染色观察心肌组织病理形态学变化以及透射电镜观察心肌线粒体超微结构的变化,评价朱日很滴丸的保护作用。采用TUNEL法检测并计算心肌细胞凋亡指数,观察朱日很滴丸对细胞凋亡的影响;采用Western Blot法分别检测了 Cyto-C、c-caspase-9、c-caspase-3、Bax、Bcl-2、P-Akt蛋白表达水平以及采用RT-PCR法检测了 Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达水平,阐明朱日很滴丸的作用机制。结果:1蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌梗死面积的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的心肌梗死面积明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的心肌梗死面积明显下降,差异有统计学意义(P<0.001);ZRH-M组的心肌梗死面积与DS组比较,无统计学意义(P>0.05)。2蒙药朱日很滴丸对MIRI后血清CK-MB、CTnT含量的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的CK-MB、CTnT含量明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的CK-MB、CTnT含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.001);ZRH-M组的CK-MB、CTnT含量与DS组比较,无统计学意义(P>0.05)。3蒙药朱日很滴丸对MIRI后大鼠心肌组织病理形态学和心肌线粒体超微结构的影响:在光镜下的观察结果,I/R组的心肌细胞形态不规则、排列发生紊乱,局部肌纤维横纹消失,可见心肌细胞发生水肿、且有局灶性变性及坏死,并伴有中性粒细胞浸润。朱日很滴丸各组、DS组的心肌细胞水肿减轻、中性粒细胞浸润的数量减少。在透射电镜下的观察,I/R组的肌丝排列疏松、紊乱;线粒体大部分出现肿胀,嵴间隙增大,伴有嵴断裂。朱日很滴丸各组和DS组的肌丝无明显疏松现象,线粒体大小形态较正常,轻中度肿胀,嵴排列基本有序,结构尚清晰完整。4蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌MDA含量及SOD活力的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的MDA值明显增高,SOD值明显降低;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的MDA值明显下降,SOD值明显升高,差异有统计学意义(P<0.001);ZRH-M组的MDA、SOD值与DS组比较,无统计学意义(P>0.05)。5蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞凋亡指数的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的心肌细胞凋亡指数明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的心肌细胞凋亡指数明显下降,差异有统计学意义(P<0.001);ZRH-M组的心肌细胞凋亡指数与DS组对比,无统计学意义(P>0.05)。6蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞Cyto-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的Cyto-C、c-caspase-9、c-caspase-3蛋白表达明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的Cyto-C、c-caspase-9、c-caspase-3蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.001);ZRH-M组、ZRH-H组的Cyto-C蛋白表达与DS组比较,无统计学意义(P>0.05);ZRH-M组的c-caspase-9、c-caspase-3蛋白表达与DS组比较,无统计学意义(P>0.05)。7蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响:与Sham组比较,I/R组的Bcl-2蛋白和mRNA表达明显下降,而Bax蛋白和mRNA表达明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的Bcl-2蛋白和mRNA表达明显升高,而Bax蛋白和mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.001);ZRH-M组、ZRH-H组的Bcl-2蛋白和mRNA表达与DS组比较,无统计学意义(P>0.05);ZRH-M组、ZRH-H组的Bax蛋白表达与DS组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ZRH-M组的Bax mRNA表达与DS组比较,无统计学意义(P>0.05)。8蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞P-Akt蛋白表达的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的P-Akt蛋白表达明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、DS组的P-Akt蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:1 蒙药朱日很滴丸具有改善大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用。2 在心肌缺血/再灌注损伤过程中,蒙药朱日很滴丸通过抑制线粒体凋亡通路发挥心肌保护作用。3 PI3K/AKT信号通路可能参与了蒙药朱日很滴丸对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。4蒙药朱日很滴丸具有治疗蒙医心刺痛的作用。