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近年来,随着水产养殖业的迅猛发展,养殖规模不断扩大,养殖密度也逐渐增加,导致养殖水域环境逐年恶化,疾病发生越来越频繁,给养殖业造成了巨大的经济损失。而细菌性病原是引起海水鱼暴发性疾病的主要病原,弧菌则是一种主要的病原菌,这其中又以哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌最为严重。本文对哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌全菌免疫反应性蛋白进行了研究,鉴定出了5个三种弧菌共同免疫反应性蛋白,并对其中一种蛋白质的免疫保护作用进行了验证。研究发现:哈氏弧菌免疫反应性蛋白:提取哈氏弧菌的全菌蛋白,通过双向电泳、Western Blot得到哈氏弧菌全菌蛋白2-DE图谱和哈氏弧菌全菌蛋白免疫转印图谱,用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件匹配得到45个蛋白质点,进行质谱鉴定后得到40个蛋白,这其中有4对蛋白虽在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白,有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质,另外,蛋白编号H17和H19是同一蛋白的两个亚基。溶藻弧菌免疫反应性蛋白:提取溶藻弧菌的全菌蛋白,通过双向电泳、Western Blot得到溶藻弧菌全菌蛋白2-DE图谱和溶藻弧菌全菌蛋白免疫转印图谱,用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件匹配得到40个蛋白质点,进行质谱鉴定后得到36种蛋白,这其中有2对蛋白虽在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;有一个蛋白点没有鉴定出来;有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质;另外,蛋白编号A24和A29是同一蛋白的两个亚基副溶血弧菌免疫反应性蛋白:提取副溶血弧菌的全菌蛋白,通过双向电泳、Western Blot得到副溶血弧菌全菌蛋白2-DE图谱和副溶血弧菌全菌蛋白免疫转印图谱,用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件匹配得到58个蛋白质点,从中挑选了17个蛋白质点进行质谱鉴定,得到14种蛋白,这其中有2对蛋白虽在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质。三种弧菌共同抗原:用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件对三种弧菌全菌蛋白2-DE图谱上标记了数字的蛋白点进行配对分析,匹配得到10个蛋白质点;分别对三种弧菌的这10个蛋白点进行质谱鉴定,最终鉴定得到5种蛋白质是三种弧菌共同的免疫反应性蛋白质,分别是dihydrolipoamide dehydrogenase、succinate dehydrogenase flavoprotein subunit、elongation factor Ts、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、triosephosphate isomerase。免疫保护率:从胶面提取蛋白dihydrolipoamide dehydrogenase腹腔注射斜带石斑鱼,4周后分别用哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌攻毒,计算免疫保护率。结果表明:由蛋白dihydrolipoamide dehydrogenase制备的疫苗对这三种弧菌的免疫保护率分别达到70%、60%、70%。