目的:脑胶质瘤是一种中枢神经系统肿瘤,对TMZ易产生耐药性,产生耐药性的机制尚不完全清楚。本研究探讨外泌体中Cx43对脑胶质瘤耐药性的影响及其可能的机制。方法:1、敏感胶质瘤细胞（U251s）和耐药胶质瘤细胞（U251r）中Cx43的转录表达和蛋白表达检测。RT-PCR和Western Blot检测U251s和U251r细胞中Cx43的转录表达和蛋白表达。CCK-8试剂盒检测Cx43抑制剂37,43gap27对U251r细胞IC50的影响。2、外泌体分离、鉴定。用超速离心法分离、提取U251s和U251r分泌的外泌体（s Exo,rExo）,用透射电镜观察外泌体的形态与大小;用Zetasuzernanozs90粒度分析仪测定外泌体的粒径分布;Western Blot检测外泌体标志蛋白CD63和TSG101的表达。3、U251s对外泌体的摄取。Western Blot检测s Exo和rExo中Cx43的表达情况;s Exo和rExo处理U251s,检测U251s细胞Cx43的表达情况;用Dio荧光染料标记两种外泌体,观察s Exo、rExo、rExo+37,43gap27处理U251s后,Exo被U251s摄取的情况。5、U251s摄取外泌体后功能的检测。实验分为四组:PBS对照组、s Exo组、rExo组以及rExo+37,43gap27组。CCK-8实验观察rExo与U251s共孵育后U251s对TMZ耐药的情况;集落克隆实验观察rExo与U251s共孵育后U251s集落形成的影响;流式细胞术检测rExo与U251s共孵育后U251s的凋亡情况;Western Blot检测rExo与U251s共孵育后U251s中凋亡相关蛋白的变化;划痕和Transwell实验观察rExo对U251s迁移能力的作用。结果:1、U251r细胞中Cx43的mRNA和蛋白表达水平均高于U251s细胞（p<0.01）。加入37,43gap27后,U251r的IC50值明显下降（p<0.01）,表明抑制脑胶质瘤细胞中Cx43的表达可以抑制脑胶质瘤细胞对TMZ的耐药性。2、采用透射电镜观察到两种外泌体的粒径分布在100nm左右,并且呈现双层膜结构;Zetasuzernanozs 90粒度分析仪显示两种外泌体粒径分布均集中在40～120nm左右,与透射电镜观察结果一致;Western Blot结果发现两种外泌体均表达CD63以及TSG101标志蛋白,并且外泌体的标志蛋白仅在外泌体表面表达丰富,在细胞中几乎没有表达。上述结果证实外泌体被成功分离提取。3、rExo中Cx43的表达水平显著高于s Exo中（p<0.001）。经rExo孵育后,U251s细胞Cx43的表达明显升高（p<0.01）。等量的s Exo和rExo分别用Dio染料标记后发现,s Exo和rExo均可以被敏感细胞U251s摄取,并且U251s摄取rExo的量明显高于摄取的s Exo,在加入Cx43抑制剂37,43gap27后,显示U251s摄取rExo的量明显减少。4、U251s在摄取rExo后,U251s对TMZ的IC50升高（p<0.01）,集落形成能力增强（p<0.001）,凋亡率下降（p<0.01）,Bax表达降低（p<0.01）,Bcl-2表达增加（p<0.01）,提示rExo可增强U251s的耐药性。加入37,43gap27后,rExo增强U251s耐药性的作用减弱。U251s在摄取了rExo后迁移能力增强（p<0.01）,同样在加入37,43gap27后,rExo促迁移的作用减弱。结论:1、Cx43在耐药脑胶质瘤细胞中的表达明显高于敏感细胞中,降低Cx43的表达能显著抑制脑胶质瘤细胞对TMZ的耐药性。2、成功分离并鉴定了外泌体,耐药脑胶质瘤来源的外泌体中Cx43表达较敏感细胞分泌的外泌体中的表达显著增加。3、耐药脑胶质瘤细胞来源的外泌体能使敏感细胞对TMZ的IC50升高、集落形成能力增强、凋亡率下降、耐药性增强,其作用可能与耐药细胞来源的外泌体中Cx43增加,使敏感细胞对外泌体的摄取增加有关。