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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON),又名呕吐毒素(vomitoxin),是由镰刀菌属病原真菌产生的真菌毒素之一。研究报道DON具有很强的细胞毒性,对于原核细胞、真核细胞均具有明显的毒性作用,DON可抑制DNA、RNA和蛋白质的合成,并诱导细胞凋亡。本试验选用鸡软骨细胞为研究对象,观察体外培养的鸡软骨细胞的形态学特征；在DON不同浓度梯度作用和不同培养时间作用下,观察DON对鸡软骨细胞增殖和分化的影响；研究DON对鸡软骨细胞凋亡的相关凋亡因子Caspase-3、C-myc和P53 mRNA的表达的影响,为深入研究DON的细胞毒性分子机制提供依据。试验I鸡软骨细胞的体外培养及DON对体外培养的鸡软骨细胞增殖与分化的影响目的：探讨17如龄鸡胚软骨细胞体外培养生长规律及DON对其增殖与分化的影响。方法：设计以1 mg·mL-1的Ⅳ型胶原酶进行消化,分离制备软骨细胞,透射电子显微镜和倒置相差显微镜下观察体外培养条件下软骨细胞的生物学特性及生长状况。添加不同浓度的DON,通过MTT法测定细胞增殖率,PNPP法测定软骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,倒置显微镜下观察软骨细胞形态的变化。结果：(1)透射电子显微镜下可观察到软骨细胞的生物学特征,倒置相差显微镜下可观察到软骨细胞生长状况；(2)与对照组相比,10、5、2、1、0.5、0.1、0.02μg·mL-1的DON均显著抑制软骨细胞增殖(P<0.01)；(3)与对照组相比,20、80、320 ng·mL-1DON极显著抑制软骨细胞ALP活性(P<0.01)；(4)倒置显微镜下发现软骨形态发生变化。结论：鸡软骨细胞培养成功为下一步研究提供了试验材料；DON能显著抑制软骨细胞的增殖与分化。试验II DON对鸡软骨细胞凋亡和氧化应激的影响目的：在建立鸡软骨细胞体外培养方法的基础上,研究DON对鸡软骨细胞凋亡和氧化应激的影响。方法：以320 ng·mL-1DON添加到培养基中进行培养,流式细胞术检测其凋亡情况。取软骨细胞原代接种于六孔板,添加含5%FBS的DMEM/F12对照组和含不同浓度的DON试验组,48 h后分别用试剂盒测定鸡软骨细胞GSH、LDH、SOD活性。结果：(1)流式检测凋亡率升高；(2)与对照组相比,20、80、320ng·mL-1DON均可使细胞培养液中GSH、LDH、SOD含量升高。结论：DON促进软骨细胞凋亡。试验ⅢI DON对鸡软骨细胞凋亡相关基因表达的影响目的：在建立鸡软骨细胞体外培养方法的基础上,研究DON对Caspase-3、C-myc和P53 mRNA表达的影响。方法：用含20、80、320 ng·mL-1的DON以及含5%FBS的DMEM/F12对照组处理鸡软骨细胞48 h后,用RT-PCR方法检测其Caspase-3、C-myc和P53 mRNA表达量变化。结果：与对照组相比,20、80、320 ng·mL-1DON可显著上调Caspase-3 mRNA的表达(P<0.01);80、320 ng·mL-1DON作用下C-myc的表达出现明显上升(P<0.01);320 ng·mL-1DON可显著上调P53 mRNA表达(P<0.01)。结论：DON可能上调Caspase-3、P53和C-myc基因1mRNA表达量,激活细胞的线粒体途径,导致细胞凋亡。