茉莉酸处理下兴安落叶松针叶cDNA文库的构建及EST分析

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为研究兴安落叶松(Larix gmelinii)诱导抗虫性的分子机理,首次以茉莉酸诱导处理后的兴安落叶松针叶为试验材料,利用CreatorTM SMARTTM cDNA Library ConstructionKit构建了cDNA文库。从文库中随机挑选单克隆测序,用表达序列标签(EST)方法研究茉莉酸诱导下兴安落叶松针叶基因的表达。从针叶中提取总RNA合成双链cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上,采用电穿孔法将重组质粒转化到DH5a中。经文库质量鉴定表明:文库库容为5×106,插入片断分布在0.5-2kb之间,平均大小为lkb左右,重组率达到95%,表明已成功构建了高质量的茉莉酸诱导处理后兴安落叶松针叶全长cDNA文库。从文库中随机挑选980个序列测序,共得到812条Unigene,包含62个序列重叠群(Contig)和750条Singletons。利用Blast与NCBI上的GenBank数据库进行同源比对分析,和公共数据库Nr库比对得到注释的有504个Unigene,其中已知功能或推测功能的序列138条,已知序列但未知功能的ESTs为575条,其余的99条未得出对比信息。将得到的750条非重复序列与GenBank中已知序列比对,获得了如植物苯丙氨酸解氨酶、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、热休克蛋白等与植物抗虫性相关的基因,这些基因的匹配度均在95%以上。茉莉酸诱导处理兴安落叶松针叶cDNA文库的构建及EST分析为进一步研究兴安落叶松在茉莉酸诱导下基因的表达调控及植物抗虫性的分子机理奠定了理论基础,也为开发利用这一基因资源提供了分子生物学基础。
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