温阳化瘀开窍方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

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目的:从细胞自噬的角度探讨温阳化瘀开窍方对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用,以期为本方更好地应用于临床夯实基础。  方法:分组及造模方法:SD雄性大鼠135只,随机分为5组,分为假手术组、模型组、温阳化瘀开窍方组(简称中药组)、3-甲基腺嘌呤组(简称3-MA组)、雷帕霉素组。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型。给药方式:温阳化瘀开窍方组于造模前12h、15min,术后3小时灌胃给中药1.5ml/100g;模型组在相同时间点予同体积的蒸馏水灌胃;雷帕霉素组在相同时间点予同体积的蒸馏水灌胃,并于造模前1小时给予鼠尾静脉给雷帕霉素1mg/100g;3-MA组在同时间予同体积蒸馏水灌胃,并于造模前1小时鼠尾静脉注射3-MA0.5mg/100g。检测指标:①参考Longa5分制法对各组大鼠进行神经功能缺失体征评分,②用TTC染色观察脑梗塞面积并推算脑梗塞体积比,③HE染色,光镜下分析缺血脑组织病理形态,④用透射电镜观察大脑皮质自噬体及自噬溶酶体情况,⑤Westem blot法检测LC3-Ⅱ的表达。  结果:1、模型总成功率为74.08%。2、各组较假手术组神经功能缺损评分显著较高,差异有统计学意义(P<0.01);中药组、3-MA组较模型组神经功能缺陷评分均数较低,差异有统计学意义(P<0.05);雷帕霉素组和模型组相比较,神经功能缺陷评分较高,差异无统计学意义(P>0.05);中药组和3-MA组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3、脑梗塞体积比,各组和假手术组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)与模型组比较,中药组及3-MA组大鼠脑梗塞体积比均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),而3-MA与中药组相当,差异无统计学意义(P>0.05)。4、与假手术组相比,各组的LC3-Ⅱ蛋白的表达水平都明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01),中药组、3-MA组的蛋白表达量比模型组减小,雷帕霉素组比模型组增大,差异均有统计学意义(P<0.01),中药组下调LC3-Ⅱ表达量,低于模型组,但高于假手术组。  结论:温阳化瘀开窍方可降低缺血再灌注损伤(MCAO/R)大鼠的神经功能缺损评分,减少脑梗死体积,同时减轻脑梗塞区域及减轻脑细胞水肿,温阳化瘀开窍可能是通过降低LC3-Ⅱ含量,抑制(MCAO/R)大鼠的自噬水平,从而减轻脑缺血再灌注损伤。
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