【摘 要】
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在肝脏疾病的基因治疗过程中,为把目的基因定向导入靶细胞,构建了具有靶向性的逆转录病毒的包装细胞,即应用RT-PCR方法分别反转录并扩增env、pres2基因,将它们分别克隆至pGEM
【机 构】
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山东省医药生物技术研究中心,卫生部生物技术药物重点实验室 济南250062
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在肝脏疾病的基因治疗过程中,为把目的基因定向导入靶细胞,构建了具有靶向性的逆转录病毒的包装细胞,即应用RT-PCR方法分别反转录并扩增env、pres2基因,将它们分别克隆至pGEM-T载体上,经测序正确后,将一目的基因亚克隆在pcDNA3.1(-)表达载体上,然后将另一目的片段从T载体上切下,克隆至经同样酶切的重组表达载体中。从而成功地构建了肝细胞靶向性系统的表达载体pcDNA3.1(-)-env-pres2和pcDNA3.1(-)-pres2-env。
In the process of gene therapy of liver diseases, targeting target gene was introduced into target cells to construct packaging cells with targeted retroviruses, ie reverse transcription and amplification of env, pres2 gene by RT-PCR, After cloning them into pGEM-T vector, after sequencing correctly, a target gene was subcloned into pcDNA3.1 (-) expression vector, and then another target fragment was cut from T vector and cloned to the same Digested recombinant expression vector. Thus, we successfully constructed the expression vector pcDNA3.1 (-) - env-pres2 and pcDNA3.1 (-) - pres2-env for hepatocyte targeting system.
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