人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达

来源 :医学研究生学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jodan2008tw
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目的:构建人源抗红细胞Rh(D)抗原单链噬菌体抗体库。方法:应用噬菌体展示技术,从分泌抗Rh(D)抗体的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,多次PCR扩增和克隆抗体可变区基因(VH/VL cDNA),经重叠延伸拼接(SOE)用编码连接肽(Gly4 Ser),的互补序列组成scFv基因,经酶切克隆入载体pCANTAB5E,使之呈现于噬菌体表面。使用完整Rh^+型红细胞进行四轮淘汰筛选,ELISA对所获抗体进行初步鉴定。结果:构建的噬菌体抗体库库容为1.2×10^7,噬菌体DNA中全长s
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