【摘 要】
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磷脂酶D是一类酯键水解酶,能够水解磷脂生成磷脂酸,并在某些羟基化合物存在的条件下,通过脱水缩合生成新型磷脂.利用磷脂酶D生成新型磷脂的活性,通过生物转化可以制备稀有磷
【机 构】
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齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔160006;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连116034
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磷脂酶D是一类酯键水解酶,能够水解磷脂生成磷脂酸,并在某些羟基化合物存在的条件下,通过脱水缩合生成新型磷脂.利用磷脂酶D生成新型磷脂的活性,通过生物转化可以制备稀有磷脂如磷酯酰丝氨酸等.因此,磷脂酶D在食品及医疗领域应用潜力巨大.实验室前期发现的蜡状芽孢杆菌ZY12来源新型磷脂酶D具有水解活性,但检测不到转酯活性,将其与链霉菌PMF来源磷脂酶D进行基因拼接,通过pET-30b重组质粒在大肠杆菌BL21(Lyss)中异源表达.实验结果表明,通过基因拼接手段对蜡状芽孢杆菌ZY12磷脂酶D的改造,使该磷脂酶D获得转酯活性.在诱导温度为16℃、IPTG添加量0.5 mmol/L、诱导时间12h,可溶性拼接型磷脂酶D活性最高87 mU/mL.转酯反应温度为45℃、pH为4.5、反应时间3h,生成磷酯酰丝氨酸产量最高7.1 mg/L.
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