【摘 要】
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[目的]贲门失弛缓症病因和发病机制不明,临床上主要采取对症治疗,难以彻底治愈,临床亟需研究出针对潜在致病靶点的药物或治疗措施。本研究将观察和分析Cajal间质细胞在Ⅱ型贲门失弛缓症患者食管下段括约肌中的数量变化及C-kit表达差异。制作贲门失弛缓症大鼠模型并检测大鼠食管下段括约肌中Cajal间质细胞的数量变化及C-kit表达差异,探讨食管下段括约肌Cajal间质细胞在Ⅱ型贲门失弛缓症中的作用。[方
【基金项目】
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云南省卫生和计划生育委员会医学后备人才培养计划（H-2017021）；
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[目的]贲门失弛缓症病因和发病机制不明,临床上主要采取对症治疗,难以彻底治愈,临床亟需研究出针对潜在致病靶点的药物或治疗措施。本研究将观察和分析Cajal间质细胞在Ⅱ型贲门失弛缓症患者食管下段括约肌中的数量变化及C-kit表达差异。制作贲门失弛缓症大鼠模型并检测大鼠食管下段括约肌中Cajal间质细胞的数量变化及C-kit表达差异,探讨食管下段括约肌Cajal间质细胞在Ⅱ型贲门失弛缓症中的作用。[方法]1.在经口内镜下肌切开术（POME）中取Ⅱ型贲门失弛缓症食管下段括约肌组织作为实验组（n=4）,食管癌术中取患者癌旁正常的食管下段括约肌组织作为对照组（n=4）。（1）免疫组化方法检测C-kit阳性Cajal间质细胞,用Image pro plus 6.0图像分析软件于组间定量分析和比较Cajal间质细胞数量在Ⅱ型贲门失弛缓症食管下段括约肌组织中的变化;（2）免疫荧光方法检测C-kit/ANO1双阳性Cajal间质细胞,用Image J图像分析软件分析后通过Graphpad prism 8软件绘图表示各荧光阳性细胞的数量差异,观察Cajal间质细胞在Ⅱ型贲门失弛缓症食管下段括约肌组织中的数量变化;（3）蛋白免疫印迹法检测Ⅱ型贲门失弛缓症食管下段括约肌组织中C-kit的表达情况,用Image J软件于组间定量分析和比较C-kit的表达差异。2.随机将24只雄性SD大鼠分组:实验组（n=14）、对照组（n=10）;采用BAC复制大鼠贲门失弛缓症模型。（1）进行食管吞钡X线检查、电生理学检查观察大鼠成模情况;（2）免疫组化方法检测C-kit阳性Cajal间质细胞,用Image pro plus 6.0图像分析软件于组间定量分析和比较Cajal间质细胞数量在大鼠食管下段括约肌中的变化;（3）免疫荧光方法检测C-kit/ANO1双阳性Cajal间质细胞,用Image J图像分析软件分析后通过Graphpad prism 8软件绘图表示各荧光阳性细胞的数量差异,观察Cajal间质细胞在大鼠食管下段括约肌组织中的数量变化;（4）蛋白免疫印迹法检测大鼠食管下段括约肌中C-kit的表达情况,采用Image J软件于组间定量分析和比较C-kit的表达差异。[结果]1.用BAC制作的大鼠模型在影像学和电生理学表现与人类贲门失弛缓症相似,贲门失弛缓症模型复制成功。2.与对照患者组比较,Ⅱ型贲门失弛缓症患者食管下段括约肌中C-kit阳性Cajal间质细胞的数量明显减少（p＜0.001）;C-kit/ANO1双阳性Cajal间质细胞明显减少（p＜0.001）;食管下段括约肌组织中C-kit蛋白表达也明显减少（p＜0.001）。3.与对照组大鼠比较,BAC处理的实验组大鼠食管下段括约肌中C-kit阳性Cajal间质细胞无明显减少（p＞0.05）;C-kit/ANO1双阳性Cajal间质细胞无明显减少（p＞0.05）;食管下段括约肌组织中C-kit的表达也无明显差异（p＞0.05）。[结论]1.Ⅱ型贲门失弛缓症患者LES组织Cajal间质细胞的数量和C-kit表达均较对照患者组明显减少,LES局部Cajal间质细胞的减少或缺乏可能是引起Ⅱ型贲门失弛缓症的重要原因之一。2.应用BAC破坏SD大鼠LES肌间神经丛,会造成大鼠LES功能障碍,并制作出与人类贲门失弛缓症患者具有类似影像学和电生理学表现的动物模型。3.BAC制作的大鼠去神经模型的食管动力障碍并未显现出与Cajal间质细胞的相关性,与临床研究不一致。
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