【目的】
　　本文主要目的是探索鼻咽癌复发相关细胞株CNE-2SI和鼻咽癌细胞株CNE-2分泌的外泌体对肿瘤血管生成的影响及相关机制。
　　【方法】
　　1.通过生物信息学方法对鼻咽癌复发相关细胞株(CNE-2SI)中的差异表达miRNA进行分析，同时检索GEO数据库、Starbase数据库。最终确定靶点miR-20a-5p。
　　2.试剂法提取鼻咽癌复发相关细胞株(CNE-2SI)和鼻咽癌细胞株(CNE-2)培养上清中的外泌体，并利用电镜、粒径及Western-blot检测特异标记物方式鉴定外泌体。利用RT-qPCR检测鼻咽癌细胞及其外泌体中miR-20a-5p的含量。
　　3.利用活细胞成像仪及共聚焦显微镜分别在12h和24h观察hUVECs对PKH26标记的外泌体摄取和内化。
　　4.利用血管生成实验检测外泌体刺激后hUVECs的成环变化。流式细胞仪检测外泌体刺激后hUVECs增殖变化。用荧光定量PCR检测外泌体刺激后hUVECs血管生成相关基因的表达变化。
　　5.采用瞬时转染(lipo3000+miRNAmimic)的方法在hUVECs中过表达miR-20a-5p。过表达成功后用荧光定量PCR检测hUVECs血管生成相关基因的表达变化。
　　【结果】
　　1.从CNE-2SI和CNE-2miRNA芯片中筛选出差异表达miRNA54条，其中表达上调的有13条，表达下调的有41条。与GEO数据库鼻咽癌miRNA芯片GSE32960对比，共同上调miRNA4条。其中miR-20a-5p与头颈部鳞癌VEGFA呈正相关。因此选择miR-20a-5p作为靶点进一步研究。
　　2.利用试剂法提取出CNE-2SI和CNE-2细胞培养上清中的外泌体，并做了电镜、粒径和细胞表面标记物(CD63、TSG101)验证。同时RT-qPCR验证了芯片结果CNE-2SI中的miR-20a-5p的表达是CNE-2的2.6倍(P＜0.05)，CNE-2SI外泌体中miR-20a-5p的含量是是CNE-2外泌体的5.12倍(P＜0.05)。
　　3.通过对外泌体荧光标记，用活细胞成像仪观察到了hUVECs在12h对外泌体吸附及内化，用共聚焦显微镜观察到了24h对外泌体摄取完全。
　　4.用等量的CNE-2SI外泌体相较于CNE-2细胞分泌的外泌体及对照组对hUVECs成环、增殖及血管生成相关基因表达有明显差异(P＜0.05)。
　　5.在hUVECs中过表达miR-20a-5p后，血管生成相关基因VEGF表达明显上调(P＜0.05)。
　　【结论】
　　1.鼻咽癌复发相关细胞株(CNE-2SI)和鼻咽癌细胞株(CNE-2)分泌的外泌体通过电镜和粒径检测数量和大小有差异，但外泌体表面标记物蛋白定量接近。且细胞中高表达的miR-20a-5p可通过外泌体传递。
　　2.鼻咽癌细胞分泌的外泌体可被hUVECs摄取和内化。
　　3.等量的CNE-2SI和CNE-2细胞分泌的外泌体均能促进hUVECs成环、增殖及血管生成相关基因表达，且CNE-2SI较CNE-2外泌体促进能力更强。
　　4.hUVECs过表达miR-20a-5p后，促进了血管生成基因VEGF的表达。说明miR-20a-5p可能是CNE-2SI较CNE-2分泌外泌体促进肿瘤血管生成的原因之一。但具体机制还有待进一步研究。